高考生物一轮总复习 生物技术实践 专题4、5 DNA和蛋白质技术、植物有效成分的提取名师课件 选修1.pptVIP

项目 DNA粗提取与鉴定 血红蛋白的提取与分离 材料选择 鸡血细胞等含DNA丰富的生物组织 哺乳动物成熟的红细胞 破碎细 胞方式 ①动物细胞：吸水涨破 ②植物细胞：洗涤剂、食盐搅拌研磨等 加蒸馏水和甲苯搅拌 去除杂 质方式 ①用不同浓度的NaCl溶液处理 ②用酒精处理 ③用蛋白酶处理等 ①透析处理 ②纯化处理 鉴定方式 二苯胺，沸水浴 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 DNA 与血红蛋白的提取和分离过程的比较 2.PCR 反应的过程及结果 (1)过程 ①变性：当温度上升到 90 ℃以上时，双链 DNA 解聚为单 链。 ②复性：温度下降到 50 ℃左右，两种引物通过碱基互补 配对与两条单链 DNA 结合。 ③延伸：温度上升到 72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷 酸(A，T，G，C)在 DNA 聚合酶的作用下，根据碱基互补配对 原则合成新的 DNA 链。 (2)结果 ①PCR 一般要经历三十多次循环，每次循环都包括变性、 复性、延伸三步。 ②两引物之间的固定长度的 DNA 序列呈指数扩增。 项目 细胞内DNA复制 PCR技术 不同点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80 ℃～100 ℃高温解旋，双链完全分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 相同点 ①需提供DNA复制的模板 ②四种脱氧核苷酸作原料 ③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 (3)细胞内 DNA 复制与 PCR 技术的比较 [高考探究] 考向 蛋白质的提取和分离、PCR 反应的过程及结果 [典例 2]随着人类基因组计划的推进和多种生物基因组测 序工作的完成，人类跨入了后基因组和蛋白质组时代。对蛋白 质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物 兴趣小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液 中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”： 请回答下列有关问题： (1)样品处理中红细胞的洗涤要用______反复冲洗、离心。 向红细胞悬液中加入一定量的低浓度 pH 7.0 的缓冲液并充分搅 拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是________________。 (2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是________________ _________，若要尽快达到理想的透析效果，可以____________ ________(写出一种方法)。 (3) 血红蛋白的纯化是通过____________ 法将相对分子质 量大的杂质蛋白除去。 (4)电泳利用了待分离样品中各种分子的_______________ ___________________等的差异产生不同迁移速度，实现各种分 子的分离。 (5)一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人 和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如下图所示，由 图可知携带者有____________种血红蛋白，从分子遗传学的角 度作出的解释是________________________________________ ________________________。 [解析](1)洗涤红细胞所用的溶液是生理盐水，根据渗透作 用原理，将红细胞置于低渗溶液中，红细胞会吸水涨破，释放 出血红蛋白。(2)血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是除去样品 中的小分子杂质；可通过增加缓冲液的量或及时更换缓冲液等 方法缩短透析时间，能尽快达到理想的透析效果。(3)样品纯化 是通过凝胶色谱法去掉分子量较大的杂质。凝胶色谱法是根据 相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。相对分子质量较小 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢； 相对分子质量较大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程 短，移动的速度快。(4)由于各种分子带电性质以及分子大小、 形状等的差异，在电泳过程中会产生不同的迁移速度，从而实 现各种分子的分离。(5)根据图示可知，镰刀型细胞贫血症的携 带者含有两种血红蛋白，原因是携带者具有(控制血红蛋白的) 一对等位基因，分别控制合成两种不同的蛋白质。 [答案](1)生理盐水 (2)除去小分子杂质 渗透(作用)原理 增加缓冲液的量或及时更换缓冲液 (3)凝胶色谱法 (4)带电性质以及分子大小、形状 携带者具有一对等位基因，可以控制合成两种不同 (5)2 的蛋白质 [考向预测] 3.红细胞中含有大量的血红蛋白，红细胞的功能主要是由 血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带 O2 和 CO2，可选 用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验，来提取和分离 血红蛋白。请回答下列有关问题： (1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：____________ _