糖复合物(生物化学二).pptVIP

细胞膜的膜蛋白是含有特定寡糖的糖蛋白，其寡糖带有识别信号，决定着细胞间相互作用时的行为，例如对肿瘤学、免疫学的研究具有重大意义。 某些结构的缺损或过度表达； 持续表达不完全的或截短的结构； 前体的堆积； 较少出现新的结构。 糖链和肿瘤（癌瘤细胞中常见糖链结构的变化） ▲　● 　　■ 　　● R □ ▲　● 　　■ 　　● R 　　● ▲　● 　　■ 　　● R O A B β1,3 β1,3 α1,2 α1,2 α1,3 β1,3 β1,3 β1,3 β1,3 α1,2 α1,3 糖链与ABO血型糖抗原结构 GlcNAc： ■ Gal：● Glc：▲ GalNAc：□ Fuc：△ ABO血型系统 抗原为A、B和O（H），是连接于糖蛋白和糖脂上的寡糖链。 三种抗原结构的差别仅在于A和B抗原比O抗原的糖链末端各多一个GalNAc或Gal。 合成GalNAc和Gal的是GalNAc糖基转移酶和Gal糖基转移酶，分别由位于9号染色体的A等位基因和B等位基因编码。 因此，遗传基因的不同是决定血型类型的分子基础。 血型不同的输血可引起溶血反应。 聚糖的分离及分析 基本过程(以糖蛋白为例） 1．糖蛋白的分离纯化 2．糖链的释放及获得寡糖片段 3．糖链及寡糖片段的分离纯化 4．聚糖一级结构的测定 某些研究糖蛋白的重要方法 方 法 观 察 内 容 和 应 用 Periodic acid-Schiff试剂 电泳分离后糖蛋白条带染深粉红色 放射活性糖与细胞共培养测 电泳分离后的糖蛋白的放射性条带 Sepharose-lectin柱层析 纯化与特殊slectin连接的糖蛋糖肽 酸水解后的组成分析 鉴定糖蛋白含有的糖基及其含量 质谱分析 可提供分子组成，多糖的糖基排列顺 序以及糖链的分枝等信息 NMR谱分析确 确定特异的糖基及其排列顺序和糖苷连 (核磁共振) 接键的位置及异头性 甲基化分析 确定糖基的连接键 氨基酸或DNA序列分析测 测定蛋白质的氨基酸排列 糖链结构分析 蛋白水解酶： 对大分子糖蛋白进行初步降解，然后对所获得的糖肽（带有糖链的蛋白片段）再进行后续处理。 糖苷酶： 分子大的糖链通常要经部分酸水解,和特异的外切糖苷酶（exoglycosidase）和内切糖苷酶(endoglycosidase)处理，变成较小的寡糖片段。 聚糖链中糖基组成的测定 将聚糖进行酸水解，然后再采用气相色谱法（GC）等对所得到的单糖进行定性和定量分析，是糖基组成及比例的常用测定方法。 仪器分析方法 质谱 (MS) 利用物质在电子轰击时所产生的各种电离分子或碎片的特殊性质，根据质荷比（m/z）的不同来确定物质的结构。 磁共振法(MR) 通过获得聚糖链的氢核磁能谱来确定其结构，其对结构的描述参数包括化学位移、积分面积、偶合常数、偶极偶合以及弛豫时间等。 糖链及寡糖片段的分离纯化 经以上方法得到的仍是糖链及其寡糖片段的混合物，需经分离纯化后才能获得单一组分用于结构测定。 根据糖链的分子大小、电荷及结合特性 分离方法：电泳、凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析及高效液相色谱(HPLC)等。 凝集素是专一识别特定糖链结构的一类糖蛋白 糖识别结构域（CRD）用固相化凝集素制备的亲和层析柱进行分离，可取得满意的分离纯化效果 糖复合物(生物化学二). 谢谢 一、蛋白聚糖的结构 核心蛋白 糖胺聚糖 糖胺 糖醛酸 葡萄糖胺 半乳糖胺 葡萄糖醛酸 艾杜糖醛酸 组成 （一）糖胺聚糖 糖胺聚糖是己糖胺和己糖醛酸二糖重复单位的聚合物。 体内重要糖胺聚糖有6种： 透明质酸、硫酸软骨素 硫酸皮肤素、硫酸角质素 肝素和硫酸类肝素 糖胺聚糖的结构和分布特点 糖胺聚糖 二糖单位 硫酸化位置