毛细管电泳化学发光生物分析新方法研究及其应用.docx

上海交通大学硕士学位论文 reported in references. We also detected six patient samples and observed that the CA125 levels in ovarian cancer patients were significantly higher than that of health individuals. Our preliminary results have illustrated that CEIA system is simple, rapid and sensitive, and it is well suitable for the large-scale quantification of CA125 and other tumor markers in clinical diagnosis. KEY WORDS: capillary electrophoresis, chemiluminescence, immunoassay, CA 125, ovarian cancer 上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 第一章 绪论 1.1 高效毛细管电泳免疫分析研究概况 高效毛细管电泳high-performance capillary electrophoresisHPCE是离子或荷电粒子以电场为驱动力在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效快速分离的一种电泳新技术当毛细管两端加上一定的电压后荷电溶质便朝与其电荷极性相反的电极方向移动由于样品组分间的淌度不同它们的迁移速度有差异因而经过一定时间后各组分将按其速度(或淌度)大小顺序 依次到达检测器被检出得到按时间分布的电泳谱图用谱峰的迁移时间或 类似于色谱学的术语保留时间作定性分析按其谱峰的高度或峰面积作定量分析 毛细管电泳方法是一种新型的分离技术但是它的历史久远多数学者以毛细管区带电泳(CZE)的出现为起点其历史可上溯到上世纪六十年代中期 1981 年Jorgenson 和 Lukacs [1]使用 75 ìm ID 的熔融石英毛细管进行 CZE利 用电迁移进样和荧光检测其理论塔板数达 4105/m成为毛细管电泳发展史 上的一个里程碑1983 年后Hjerten 先后建立了毛细管凝胶电泳[2]和毛细管 等电聚焦[3]1984 年Terabe 运用含 SDS 胶束的缓冲液电泳分离了中性组分 从而建立了胶束电动毛细管色谱 年代初开始了芯片毛细管电泳操作模式的研究[4-7]目前已在芯片上进行了荧光标记的氨基酸[8]DNA 限制性片段[6 9 10]PCR 产物[11 12]短链寡核苷酸[13 14]及测序片段[15 16]等的分离分析研究 免疫分析是基于抗原(Ag) 和抗体(Ab) 特征性免疫反应的一种技术由于免疫分析试剂(抗体)[17]在免疫反应中所体现出的独特的选择性和极低的检测限, 使这种分析手段在临床生物制药和环境化学等领域得到广泛应用各种标记 技术(放射性标记荧光标记化学发光酶 标记等) 的发展, 使免疫分析的选择性更加突出传统的免疫分析模式多 1 上海交通大学硕士学位论文 是将 Ab (或 Ag) 连接在固相载体上然后与溶液中的 Ag (或 Ab) 反应形成 固相免疫复合物如果 Ag (或 Ab) 是酶标的 将复合物与游离的 Ab (或 Ab* ) Ag (或 Ag*) 分离后 可定量检测固相免疫试剂所连接的 Ab (或 Ag) 上酶的活性当使用其它标记时采用相应的方法进行检测但传统方法大多数都是手工操作过程繁复反应时间长且由于免疫试剂在固相表面附着的重现性低使免疫分析遇到了许多难以解决的问题 毛细管电泳免疫分析CEIA是基于毛细管电泳高效分离及其免疫分析中抗体与抗原特异性结合原理发展起来的一种分析新方法这种方法能够高效快速的分离抗体抗原及其结合物同时定量分析生物体内各种生物样品的含量在临床医学上有着巨大的应用价值早在 1986 年 Hurrell 等[18]就利用毛细管电泳对抗原抗体和半抗原进行了分离1991 年 Nielsen 等人第一次报道了利用毛细管区带电泳 UV 检测分离出了人体生长荷尔蒙hGH及 其结合物[19]1993 年Schultz 和 Kennedy 首次提出了毛细管电泳中竞争免疫分析和非竞争免疫分析的概念[20]从那以后优化和利用这门技术来确定不同样品中抗原的含量的报道越来越多并且所得的结果与传统的免疫分析方法非常相符[21]充分显示了这门技术的可靠性和巨大的发展潜力 与传统的免疫分析法相比毛细管电泳免疫分析有很多优点其中最主要的优点就是进样量少样品损耗低其次是可以相对容易的检测多种样品[22] 自动化程度高第