激光诱导荧光检测器系统的构建.docVIP

PAGE iv PAGE v 激光诱导荧光检测器的研制与性能评价 CONFIGURATION OF LASER INDUCED FLUORESCENCE DETECTOR AND EVALUATION OF ITS PERFORMANCE 内容摘要 激光诱导荧光检测器（LIFD）是目前用于检测化学及生物样品的最灵敏检测器之一，广泛用于高效液相色谱（HPLC）、微柱液相色谱（Micro-LC）及毛细管电泳（CE）等分离领域。为提高LIFD的检测灵敏度，必须最大限度降低背景源，同时尽可能提高荧光信号的采集效率。本研究以固态二极管激光器为激发光源，构建了基于共聚焦光学配置的LIFD。通过在检测池中设置反射镜，使背离荧光接收光路的荧光信号经反射返回到荧光采集系统，以提高荧光信号的采集效率。长通及带通滤光片的组合使用，最大限度的降低了背景源。构建了适合于HPLC的LIFD检测系统，论文主要包括以下研究工作： 第一章对荧光检测的发展过程进行了回顾，讨论了荧光检测技术的原理、荧光分子的激发及去激过程、荧光检测的定量基础，在分析LIFD目前的研究及应用现状基础上，提出论文研究工作的主要内容。 第二章采用共聚焦光学配置设计了LIFD的光学系统。对所研制LIFD的基线噪声、漂移、灵敏度、检测限及线性范围等性能指标进行了测试，结果表明，总体性能指标优于Backman公司的MDQ P/ACETM LIF、Unimicro 公司的TriSepTM-2100 LIF及Picometrics公司的ZETALIF等产品的性能指标。对异硫氰酸酯荧光素（FITC）的检测灵敏度大于1012mV/mol/L，而浓度检测限低于10-14 mol/L。 第三章在剖析激光诱导荧光检测器各组成光学元件功能的基础上，确定了所研制LIFD的光学元件，包括MBL-Ⅱ蓝光激光器、DM490二色镜、GCO-2112聚光及荧光采集物镜、LP 510长通滤光片及BP 525带通滤光片、GCL-0106622双胶合消色差透镜、CR131光电倍增管。 第四章针对普通检测池只能采集所发射单侧球面荧光信号，而另半球面荧光信号未被采集的缺点，设计了反射式Z-型检测池，使与采集光路反方向的荧光信号经反射镜反射而进入到荧光采集系统，从而提高了荧光信号的采集效率，进而使LIFD的检测灵敏度大幅提高。 第五章构建了LIFD的光学系统及电路系统，以FITC为衍生化反应试剂，采用柱前衍生化方法，通过对氨基酸样品的检测，考察了HPLC-LIFD检测系统的检测限、线性范围及系统重复性。结果表明所研制LIFD对氨基酸FITC衍生产物的检测限低于10-13 mol/L；线性范围大于104；17种氨基酸衍生物重复测定的结果表明，保留时间的RSD值均小于0.5％，LIFD系统具有良好的重复性。 关键词：激光诱导荧光检测器，高效液相色谱，共聚焦光学，二极管激光器， Z-型反射式检测池 ABSTRACT Laser-induced fluorescence detector (LIFD) is one of the most sensitive detection modes in chemical and biological separations. In addition, it is well-suited for detection in small volumes, and is widely used in high performance liquid chromatography (HPLC), micro-column liquid chromatography (Micro-LC), capillary electrophoresis (CE) and other separations. The key to achieve the best sensitivity is the ability to maximize signal while minimize background sources. In this study, solid-state diode laser was used as the excitation source, and confocal optical configuration was applied. Furthermore, a reflective mirror was installed in the flow cell, which could reflect the deviated fluorescent signal to the optical collection system, so as to improv