核糖体(RIBOSOME)要点事项.ppt

第十一章 核糖体(ribosome) 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一的 功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确 地合成多肽链。 ?核糖体的基本类型与成分 ?核糖体的结构 ?核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 一、核糖体的基本类型与成分 ?核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) ?核糖体的形态、大小、数量和分布 ? 基本类型 ?附着核糖体 ?游离核糖体 ?70S的核糖体 ?80S的核糖体 ?主要成分 ?r蛋白质：40%，核糖体表面 ?rRNA:60%,，核糖体内部 ?大小亚基装配：在细胞质中二者常常呈游离状态， 当小亚基与mRNA结合后，大亚基才与小亚基结 合形成完整的核糖体。 ●形态结构 在电镜下，核糖体是一种电子密度较高的圆形或椭圆形致密小颗粒，直径25nm。每个核糖体由大、小两个亚基组成. ●数量 一般几百到几百万个（与细胞种类和细胞内蛋白合成 程度有关） ●分布 几乎一切细胞内（成熟哺乳动物红细胞等除外） 胞质、叶绿体、线绿体 二、核糖体的结构 ?r蛋白和rRNA的结构与分析方法 ?蛋白质合成过程中很多重要步骤 与50S核糖体大亚单位相关 R蛋白和rRNA的结构与分析方法 r蛋白的结构及分析方法 ?结构： 核糖体的重组装是自我装配过程； 蛋白质结合到rRNA上具有先后层次性； 一级结构非常保守 ?分析方法： rRNA的结构 ?16S rRNA 的结构 ?70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的r蛋白 关系的 空间模型 ?同一生物中不同种类的r蛋白的一级结构 均不相同，在免疫学上几乎没有同源性。 ?不同生物同一种类r蛋白之间具有很高 的同源性， 并在进化上非常保守。 说明：核糖体可能来自共同祖先，且进化 上非常保守。 ?离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； ?双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在 结构上的相互关系 ?电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖 体的亚单位上的定位。 ?16SrRNA的一级结构是非常保守的 ?16SrRNA的二级结构具有更高的保守性： 臂环结构(stem-loop structure) ?rRNA臂环结构的三级结构模型 蛋白质合成过程中很多重要步骤与50S核糖体大亚单位相关 ?涉及的多数因子为G蛋白(具有GTPase活性)，核糖体上 与之相关位点称为GTPase相关位点。 ?最近人们成功地制备L11-rRNA复合物的晶体，获得了 其空间结构高分辨率的三维图象。 ?这一结果证实了前人用各种实验技术所获得的种种结论 ?提出直观、可靠且比人们的预料更为精巧复杂和可能的 作用机制，从而为揭开核糖体这一具有30多亿年历史的 古老的高度复杂的分子机器的运转奥秘迈出了极重要的 一步。 三、核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 ?核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 ?在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 核糖体上具有一系列与蛋白质 合成有关的结合位点与催化位点 ?与mRNA的结合位点 ?与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点——氨酰基位点，又称A位点 ?与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点——肽酰基位点，又称P位点 ?肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点——E位点(exit site) ?与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶 (即延伸因子EF-G)的结合位点 ?肽酰转移酶的催化位点 ?与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和 终止因子的结合位点 在蛋白质合成中肽酰转移酶的活性研究 ?核糖体蛋白 ?在核糖体中rRNA是起主要作用的结构成分 ?r蛋白质的主要功能 核糖体蛋白 ?很难确定哪一种蛋白具有催化功能： 在E.coli中核糖体蛋白突变甚至缺失对蛋白 质合成并没有表现出“全”或“无”的影响。 ?多数抗蛋白质合成抑制剂的突变株，并非由 于r蛋白的基因突变而往往是 rRNA基因突变。 ?在整个进化过程中rRNA的结构比核糖体蛋白 的结构具有更高的保守性。 在核糖体中rRNA是起主要作用的结