ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程.doc

ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程 (一)检验目的 检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。 (二)检验原理 1.手工试管法、玻片法或纸板法 利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。 2.微柱凝胶法 ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。 3.玻璃珠微柱法 ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。 (三)适用范围 适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。 (四)设备性能参数 各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。 (五)器材与试剂 1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100mm×12mm和75mm×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。 (六)标本要求 EDTA-K2或EDTA-K3抗凝静脉血≥3ml经B600-A型离心机在1760g条件下离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。 (七)校准步骤 各类血型配血系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》《SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》。 (八)操作步骤 1.试管法 (1)ABO血型正定型试验：①取两支洁净试管，做好标记，按试管标记向试管中加入抗A、抗B血清各1滴；②向每管中各加入1滴3％～5％被检红细胞盐水(血清或血浆)悬液；③轻轻混合试管内容物，经KA-2200离心机在1000g条件下离心15秒；④结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；⑤记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。用ABO反定型试验进一步验证正定型结果。 (2)ABO血型反定型试验：①取两支洁净试管，做好标记，向每管中各加2滴被检血清(或血浆)。②按试管标记向试管中加入3％～5％A型、B型试剂红细胞各1滴。③轻轻混合试管内容物，经KA-2200离心机在1000g条件下离心15秒。④结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块。⑤记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。与正定型结果进行相互验证。⑥如果反应较弱，可将试管于室温(或4℃)放置5～10分钟，以促进弱抗体的反应，再离心观察结果。如果反应还是很弱可以增加血清 (或血浆)滴数，最多增加到6滴以加强反应。 (3)RhD血型鉴定试验：①取一支洁净试管，做好标记，加入抗D血清1滴；②向试管中加入1滴3％～5％被检红细胞盐水(血清或血浆)悬液；③轻轻混合试管内容物，经KA-2200离心机在1000g条件下离心15秒；④结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；⑤记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。 2.玻片法 (1)ABO血型正定型：①在标记的玻片