6α-hydroxy-lup-20(29)-en-3-on-28-oic acid对前脂肪巾细胞成脂分化和胰岛素抵抗细胞葡萄糖消耗的影响.docxVIP

广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作 广州中医药大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作 所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己 在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名蜘 Et期：训ff，年，月1L日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向 国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中 医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名!燃论文导师签 Erj期：卯。年P月、，1／日 基金项目本学位论文是在沈小玲教授主持的“重大新药创制”国家科技重大专项课题(编 基金项目 本学位论文是在沈小玲教授主持的“重大新药创制”国家科技重大专项课题(编 号2009ZX09103—436)，以及广东华南中医药协同创新中心艾滋病与肿瘤创新中药研发 团队项目(A1一AFD01514A07)的经费资助下完成的。 摘 摘 要 2型糖尿病(Type 2 diabetes Mel l i tus，T2DM)主要是因机体产生胰岛素抵抗而造 成葡萄糖(Glucose，GLU)吸收障碍为特征的代谢性综合征，是目前严重危害人类健 康的一种常见病和多发病。目前尚无特效的根治糖尿病药物，因此研究和开发新的用 于糖尿病治疗药物十分必要。 背景与目的： 本课题组前期研究发现，从珊瑚树(Viburnum odoratissimum)中获得的羽扇豆 烷型三萜6 Q-hydroxy一】up一20(29)一eli一3-on一28一oic acid(B21)能显著促进人肝癌细胞 和小鼠脂肪细胞的葡萄糖消耗，显示了良好的胰岛素增敏作用。为了探讨B21作为开 发糖尿病治疗药物先导化合物的可能性，本研究利用人内脏来源的前成脂肪细胞 (Human Whi te Preadipocytes—visceral，HWP—visceral)、小鼠前脂肪细胞(3T3一L1 preadipocytes)和小鼠成肌细胞(C2C12 myblasts)为模型，对B21抑制脂肪细胞分 化、增强胰岛素敏感性的作用和机制进行了深入的研究。 方法： 1．文献研究 检索糖尿病发生发展的最新相关机制、治疗状况及治疗糖尿病药物的新动态，并对其 进行归纳总结。 2．实验研究 2．1 B21对前脂肪细胞增殖和分化的影响 2．1．1将B21作用于对数生长期的3T3一LI preadipocytes和HWP—visceral细胞48h， CCK-8法检测不同浓度B21作用下的细胞活力，评价其对细胞增殖的影响。 2．1．2 3T3一L1 preadi pocytes和HWP—viscera]细胞在进行脂肪分化诱导的同时加入 不同浓度B21，分化诱导持续8d。采用油红0染色分化完成的脂肪细胞；采用甘油三 酯(TG)定量检测试剂盒检测细胞内TG含量。评价B21对脂肪细胞分化和甘油三酯 合成的影响。 2．2 B21对脂肪细胞和肌细胞膜岛素抵抗的影响：在：j1’3一I。l adipocytes、人脂肪细 胞{一luman Whi te Adipocytes—Visceral，IIWA—vi sceral以及小鼠肌细胞(C2C12 myocytes模型一h采用l u M的地塞米松(Dexamethason，DXM)诱导细胞出现胰岛素抵 抗，同时将不同浓度B21作用于细胞48h，收集细胞培养液，GLU氧化酶～过氧化物酶 法(GOD—POD法)检测GLU浓度，测定细胞对GLU的消耗，评价B21对细胞胰岛素敏 感性的作用。 2．3 B21抑制脂肪细胞分化、逆转脂肪细胞胰岛素抗性的机制研究 2．2．1 2．2．1 3T3一L1 preadipocytes在不同浓度B21存在下进行脂肪细胞分化诱导8d。实 时荧光定量RT—PCR法测定PPAR丫和C／EBP Q的mRNA水平；提取总蛋白，ELISA法测 定脂肪酸合成酶FAS的含量。分析B21对脂肪细胞分化过程中的关键转录因子PPAR Y 和C／EBP Q基因的表达、以及对FAS表达的影响。 2．2．2不同浓度的B21与1 u M的DXM共同作用于3T3一L1脂肪细胞48h。RT-PCR法测 定细胞内PTPlB的mRNA水平，分析B21对DXM诱导的胰岛素抵抗脂肪细胞中PTPlB 基因过表达的影响。 2．2．