【全程复习策略】高考生物大一轮 专题1 基因工程配套精讲名师优质课件 新人教版选修3.ppt

3.(2012·江苏高考)图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题： (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由 　　　　　　　　　连接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产生的末端是 　　　　末端，其产物长度为　　　　　　　　　　。 (3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有　　　　种不同长度的DNA片段。 (4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是　　　　。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加　　　　的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 【解题指南】解答本题特别关注以下三点： (1)明确碱基、磷酸和脱氧核糖之间的连接关系。 (2)准确识别各种限制酶的切割位点。 (3)知道重组质粒中最少含有一种抗性基因。 【解析】(1)两条脱氧核苷酸链之间的碱基通过氢键相连，一条脱氧核苷酸链中相邻的碱基通过脱氧核糖-磷酸-脱氧核糖连接。 (2)根据限制酶SmaⅠ识别的碱基序列可知，限制酶SmaⅠ切割产生的末端为平末端。在图1序列中共有2个SmaⅠ的切割位点，切割后形成3种不同长度的产物，分别为537 bp、790 bp、661 bp。 (3)图1中有SmaⅠ的两个识别序列，完全切割后产生3个不同长度的DNA片段，若虚线方框中的碱基对被T-A碱基对替换，再经SmaⅠ识别并完全切割后会产生2个DNA片段，其中1个DNA片段与未替换前完全切割的相同，因此经完全切割后共产生4种不同长度的DNA片段。 (4)切割目的基因可选用限制酶BamHⅠ和限制酶MboⅠ，但限制酶MboⅠ可将质粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因都破坏，而限制酶BamHⅠ只破坏抗生素A抗性基因，因此只能选用限制酶BamHⅠ；重组质粒中含有抗生素B抗性基因，因此可在含抗生素B的培养基上培养。 答案：(1)脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖 (2)平　537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamHⅠ　抗生素B　同种限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D与质粒反向连接 【延伸探究】 (1)若本题(1)中“一条”换为“两条”，则依靠什么结构连接？ 提示：DNA两条链通过碱基互补配对形成氢键的方式连接在一起。 (2)对图2所示的质粒用MboⅠ限制酶切割后，放在含有抗生素A的培养基中培养，能否生长？为什么？ 提示：不能生长。因为抗生素A抗性基因中含有GATC序列，一旦用MboⅠ限制酶切割该质粒后，会破坏该基因，从而无法抵抗抗生素A。 4.(2012·福建高考)肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。 请回答： (1)进行过程①时，需用　　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为　　　　。 (2)进行过程②时，需用　　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。 (3)研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取　　　　进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中　　　　(RAS mRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。 【解题指南】解答本题的关键是注意两点： (1)目的基因和载体需用同一种限制性核酸内切酶切割。 (2)题干信息“let-7基因导入肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制”，由此推出肺癌细胞增殖受到抑制的原因是let-7基因翻译抑制。 【解析】(1)基因工程中目的基因和载体需要同一种限制性核酸内切酶切割产生相同的黏性末端，使目的基因与载体结合，载体中与RNA聚合酶识别和结合的部位是启动子。 (2)原代培养产生的细胞需用胰蛋白酶处理，分散成单个细胞。 (3)检测目的基因是否转录需提取受体细胞中的RNA进行分子杂交；由图2可知let-7基因翻译抑制则不能产生RAS蛋白，因此RAS蛋白减少，肺癌细胞的增殖就受到抑制。 答案：(1)限制性核酸内切　启动子 (2)胰蛋白　(3)RNA　RAS蛋白 5.