【创新方案】高中生物 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离名师优质课件 新人教版选修1.pptVIP

* 返回 专题5 课题3 课前预习·巧设计 名师课堂·一点通 重点突破 创新演练·大冲关 知识清单 案例师说 课堂强化 每课一练 了解 从复杂体系中提取生物大分子的 基本过程和方法 理解 凝胶色谱法的原理和方法 1.凝胶色谱法的原理和方法 2.样品的预处理、色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 一、凝胶色谱法 1．概念 也称作 法，是根据 的大小分离蛋白质的有效方法，凝胶实际上是一些微小的 球体。 分配色谱 相对分子质量 多孔 多孔球体 多糖类化合物 贯穿的通道 (2)分离原理：相对分子质量较小的蛋白质容易进入 的通道，路程 ，移动速度较慢； 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程 ，移动速度较快。 凝胶内部 较长 相对分 子质量较大 较短 二、缓冲溶液 1．作用 在一定范围内，缓冲溶液能抵制 对溶液pH的影响，维持 基本不变。 2．配制 通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，调节缓冲剂的 就可以制得在 范围内的缓冲液。 外界酸和碱 pH 使用比例 不同pH 三、电泳 1．概念 带电粒子在 的作用下发生 的过程。 2．原理 (1)许多重要的生物大分子，如 、 等都具有 的基团，在一定的pH下，这些基团会带上 或 。 (2)在电场的作用下，这些带电分子会向着 移动。 (3)电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中各种分子的分离。 电场 迁移 多肽 核酸 可解离 正电 负电 与其所带电荷相 反的电极 带电性质的差异 大小 形状 迁移速度 四、血红蛋白提取和分离 1．样品处理及粗分离 (1)红细胞的洗涤：目的是去除 。 (2)红细胞的释放：在 和 作用下，借助磁力搅拌器的 作用，红细胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液：离心(以2 000 r/min速度，离心10 min)→观察到试管中的溶液分4层，从上往下依次为： 杂蛋白 蒸馏水 甲苯 搅拌 第1层： 的甲苯层。 第2层： 的沉淀层—— 薄层固体。 第3层： 的水溶液—— 透明液体。 第4层：其他杂质的 色沉淀物。 将液体用 过滤，除去 ，于 中静置片刻后，分出下层的 液体。 无色透明 脂溶性物质 白色 血红蛋白 红色 暗红 滤纸 脂溶性沉淀层 分液漏斗 红色透明 (4)透析——粗分离。 ①过程：取1 mL的 溶液装入 中，将其放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol·L－1的 中(pH＝ )，透析12 h。 ②原理：透析袋能使 自由进出，而将 保留在袋内。 ③目的：去除 。 血红蛋白 透析袋