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基因工程各章综合练习题 第一章基因工程的概念 第一节 基因工程诞生的理论基础 ?确定了遗传信息的携带者是DNA而不是蛋白质。明确了遗传的物 质基础问题 1.肺炎双球菌转化实验 1944年Avery,确定了基因的分子载体是DNA,而不是蛋白质。 2.噬菌体转染实验 1952年Alfred Hershy和Marsha Chase进一步证明遗传物质是 DNA 二.揭示了 DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理，解决了基 因的自我复制和传递的问题。 1953 年 James D? Watson 和 Francis H? C? Crick 揭示了 DNA 分子的双螺旋结构和半保留复制机制O 三?提出了 “中心法则”和操纵子学说，并成功地破译了遗传密码, 从而阐明了遗传信息的流向和表达问题 1958年Crick又提出了遗传信息传递的“中心法则” 1964 年 Marshall Nirenberg 和 Gobind Khorana 等终于破译了 64 个遗传密码 F. Jacob和 J. Monod在1961年提出了操纵子学说 http://baike? baidu. com/view/225864. htm 第二节 基因工程诞生的技术基础 DNA分子的体外切割与连接 1?限制性内切酶(restriction enzymes) Werner Arber理论预见限制酶 1968年H. 0. Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶 Daniel Nathans用限制酶切得SV40 DNA片断 3人于1978年获得Nobel生理或医学奖 2. DNA 连接酶 2. DNA 连接酶(ligase) 1967年5个实验室几乎同时发现了 DNA 连接酶 二.DNA分子的核昔酸序列分析 1975 年 F? Sanger A. Maxam 和 W? G订bert 发明了 DNA 快速 测序技术， 1980年Nobel化学奖 三?载体的构建 1972 细胞里的大量扩增 四?转化技术 1970年M. Mandel和A. Higa发现经过氯化钙处理的大肠杆菌 容易吸收噬菌体DNAo 1972年S?Cohen发现这种处理过的细菌同样 能吸收质粒DNA 五?琼脂糖凝胶电泳和southern转移杂交技术 1960s发明了琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度的DNA分离开;DNA 印迹技术由Southern于1975创建，称为Southern印迹技术 二.基因工程的定义和特征 1 ?定义 在体外将核酸分子插入病毒.质粒或其它载体分子，构建遗传物 质的新组合，并使之渗入到原先没有这类分子的寄生细胞内，而能持 续稳定地繁殖 在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接, 然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA）,转入微生 物.植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出基因产物 第二章 酶学基础 1拷贝数就是指某目的基因（可以是质粒）在某一生物群体或个 体中存在的个数.单拷贝就是该基因在基因组中只有一个，多则 指有多个。 （一）在细菌细胞中，某种特定质粒的数目。根据复制特性, 质粒分严紧型和松弛型两类，前者在细胞中只含1?2个，而后 者含10?15个以上。恒定的拷贝数与质粒复制控制系统、宿主 细胞遗传背景及生长条件有关。质粒复制控制系统首先通过调节 复制的起始点来控制拷贝数,调节因素包括阻遏蛋白、反义RNA 和某些顺向重复也1。有些质粒还有其他控制系统,如有分配功 能的par系统和确保质粒稳定遺佳的ccd系统。一旦质粒上与调 控有关的基因或位点突变,可使拷贝数明显增加或减少。 （二）。 工具酶：进行DNA操作经常要用到的“工具”一一酶 四大工具酶：核酸酶nucleasespolymerase连接酶ligase聚合酶修饰酶 modification enzyme第一节 限制性内切酶【命名、识别位点、切割过程、末端特征（粘端、平端）、酶活单位及定义】限制性内切酶：指能识别特定的DNA序列，在一定的条件下，可在识别位置上或附近对DNA进行切割的酶。二?限制性内切酶的命名与种类按照国际命名法，限制性内切核酸酶属于水解酶类。由于限制性酶的数量众多，而且越来越多，并且在同一种菌中发现几种酶。为了避免混淆,1973 四大工具酶：核酸酶nucleases polymerase 连接酶ligase 聚合酶 修饰酶 modification enzyme 第一节 限制性内切酶【命名、识别位点、切割过程、末端特征（粘 端、平端）、酶活单位及定义】 限制性内切酶：指能识别特定的DNA序列，在一定的条件下，可 在识别位置上或附近对DNA进行切割的酶。 二?限制性内切酶的命名与种类 按照国际命名法，限制性内切核酸酶属于水解酶类。由于限制性 酶的数量众多，而且越来越多，并且在同一种菌中发