基因工程切割与标记基因检测习题.docxVIP

基因工程习题 1. 一环状DNA分子，设其长度为1.限制性核酸内切酶A在其上的切点位于0.0处；限制性核 酸内切酶B在其上的切点位于0.3处；限制性核酸内切酶C的切点未知.但C单独切或与A或 B同时切的结果如下表，请确定C在该环状DNA分子的切点应位于图中的哪处（ ） C单独切 长度为0, 8和0, 2的两个片段 C与A同时切 长度为2个0, 2和1个0, 6的片段 C与B同时切 长度为2个0, 1和1个0, 8的片段 B. 0.4 和 0.6 处 C. 0.5 和 0.7 处 D. 0.6 和 0.9 处 2.某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到An）p「或Tetr?|?会导致相应的基因失活（Amp「表示 氨节青霉素抗性基因，Tet「表示四环素抗性基因）.有人将此质粒载体用BamHl酶切后，与用 Bamlll酶切获得的冃的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大 肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化.被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有坏 状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌.回答下列问题: 复制原点BamW（1） 质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件 有 （答出两点即可）.而作为基因表 达载体，除满足上述基本条件外，述需具有启动子和终止 子. 复制原点 BamW （2） 如果用含有氨节青霉素的培养基进行筛选，在上述 四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因 是 ;并且 和 的细胞也是不能区分的， 其原因是 .在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基 因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有原因是 的固体培养基. （3）基因工程屮，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自 下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其 图1Hd I目的基因 图1 Hd I 目的基因 限制酶 BamH I Bel I Sau3A I Hindlll 识别序列及切割位点 G^GATC C (CTA(yi i Lai c a ACTAC^T Uatc CTAGa 〔GATC CTAG| Hind III BamW I引物屮 I如— （1）用图屮质粒和目的基因构建重组质粒，应选用 两种限制酶切割，酶切后的 载体和目的基因片段，通过 酶作用后获得重组质粒.为了扩增重组质粒，需将其转入 处于 态的大肠杆菌. （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基屮添加 平板上长出的 菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中 . （3）若BamH I酶切的DNA末端与Bel I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列 为 ,对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”） 切开. （4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段. 纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构 建了含3种不同基因片段的重组质粒，下而是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的 示意图. 图例：O 质粒 图例：O 质粒 m u□伯号肚编码序列 em 闪片fQ 据图回答： （1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制輛，其识别序列如图，为防止酚切片段的自身环接, 可选用的限制酶组合是 或 A.①②B.①③C.②④D.③④ ? ? ? ? GGATCC AGATCT ATCG A T TCCGGA C C T A G G TCTAGA TAGCTA AGGCCT ? ? ? ? 限制1W① 限制静② 限制购③ 限制IW④ （2） 设置菌株I为对照，是为了验证 不携带纤维素酶基因. （3） 纤维素酶基因的表达包括 和 过程，与菌株II相比，在菌株III、 TOC \o 1-5 \h \z IV中参与纤维素酶合成和分泌的细胞器还有 . （4） 在以纤维素为唯一 C源的培养基上分别培养菌株1［、III、IV,菌株 不能存活，原 因是 . （5） 酵母菌生产洒精的细胞部位是 ，产生酒精时细胞的呼吸方式是 ， 在利用纤维素生产酒精时，菌株IV更具有优势，因为导入的中重组质粒含有 .使 分泌的纤维素輛固定于细胞壁，减少因培养液更新二造成的酚的流失，提高輛的利用率. 胰岛素A、B链分别表达法是生成胰岛素的方法之一，图1是该方法所用的基因表达载体， 图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程（融合蛋白A、B分别表示B ■半乳 糖昔酶与胰岛素A、B链融合的蛋白），请回答下列问题: 导入人肠杆诵纯化人肠村伯奴制原点a或蟲芻裔区融合员门B?9 Ife闊索A链肽段枳化猱“纯化培畀尸、纯化-ftp 导入 人肠杆诵 纯化 人肠村伯 奴制原点