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制备和应用固相化酶 【学习目标】 简述固定化酶的作用和原理。 说出酶固定化的方法 尝试用包埋法制备固定化酵母细胞 探讨固定化酶的应用价值。 【考纲要求】制备和应用固相化酶：A 【基础回顾】 一、 基础知识 TOC \o 1-5 \h \z 固定化酶：利用物理或化学的方法将酶与 结合在一起形成的仍具有 的 酶复合物。常用方法：包括 、 和 法。 固定化细胞是通过各种方法将细胞与一定载体结合，是细胞仍具有原有的生物活性的 技术。 3 ?包埋法固定化细胞是指将微生物细胞均匀地包埋在 的 性载体中o 常用的载体有 等。 二、 实验操作 制备固定化酵母细胞： 步骤： —配制CaCl2溶液一 -海藻酸钠 溶液与酵母细胞混合?固定化酵母细胞。 用固定化酵母细胞发酵: 将固定好的酵母细胞（凝胶珠）用 冲洗2-3次， 将10%的葡萄糖溶液加入锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于 °C下发酵 24ho 【探究过程】 一、基础知识 固定化酶的优点： o 缺点： O 【思考1】下列属于固定化酶在利用时特点的是 有利于酶与产物分离 B.制成的加酶洗衣服可以被反复利用 C.能自由出入依附的载体 D.能催化一系列的酶促反应 固定化细胞技术 TOC \o 1-5 \h \z _般来说，酶更适合采用 和 法固定，而细胞多采用 法 固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被 或 ,而 个小的酶容易从 中漏出。 从操作的角度考虑，固定化酶和固定化细胞两种技术中，更为容易的是 , 对酶活性影响更小的是 。固定化细胞固定的是 （一种或一系列） 酶。如果想将微生物的发酵过程变成连续的酶反应，应选择 技术。如果反 应物是大分子，应该采用 技术。 二、实验操作 制备固定化酵母细胞： 酵母细胞的活化f配制CaCl2溶液一配制海藻酸钠溶液?海藻酸钠溶液与酵母细胞 混合f固定化酵母细胞。 【思考2】实验操作步骤中最重要的一环是哪一步？如操作不当后果如何？应如何操作? 【思考3］下列有关制备固定化酵母细胞叙述错误的是（ ） 在向溶化好的海藻酸钠溶液中加入的必须是已活化的酵母细胞 溶化好的海藻酸钠溶液必须冷却至室温，才能加入细胞 溶解海藻酸钠，最好采用小火，或者持续加热的方法 在固定化酵母过程中，要以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的 CaCL溶液中 0Ki用固定化酵母细胞发酵 0 Ki 【思考4］右图1表示制备固定化酵母细胞的有关操 作，图2是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示意 图.下列叙述正确的是（多选）（ ） 刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制 备混合液- 图1中X溶液为CaCL溶液，其作用是使海藻酸 钠形成凝胶珠 图2发酵过程中搅拌的目的是为了使培养液与酵 母菌充分接触 图1中制备的凝胶珠用蒸馅水洗涤后再转移到图 2装置中 三、结果分析 【思考5】制作的凝胶珠的颜色和形状如何？ 【思考6】发酵的葡萄糖溶液状态如何? 【思考7】是否可以利用固定化细胞发酵果酒和果醋? 【思考8】固定化酶和固定化细胞是否可以长期使用？为什么？ 【思考9】直接使用酶、使用固定化酶和使用固定化细胞催化反应，各有哪些优点和不足? 请填写下列表格中的相关内容 类型 优点 不足 直接使用酶 固定化酶 固定化细胞 【思考10］请根据上述过程回答下列问题 （1） 酵母菌活化就是 状态。活化前应选择足够大的容器，因 为酵母细胞活化时 O （2） 影响此实验成败的关键步骤是 o此步的操作 应采用 O （3） CaCl2溶液在形成凝胶珠时的作用原理是 o观察形成的凝胶珠颜色和形状：如果颜色过浅，说 明 ;如果形成的凝胶珠不是 形，说明实验操作失败。 （4） 在工业生产中，细胞的固定化是在严格 的条件下进行的。 【习题巩固】 1.下列关于固定化酶的说法正确的是A.酶被固定在不溶于水的载体上，可反复利用B.酶作为催化剂，反应前后结构不改变，所以固定化酶可永远利用下去C.酶由于被固定在载体上，所以丧失了其高效性和专一性D.被固定化的酶其活性部位完整，所以不受高温、强碱、强酸等条件影响2.下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是（固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件D.利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物3.右图是应用固定化酵母进行葡萄糖发酵的装置，下列说法中不正确的是（ ） 1. 下列关于固定化酶的说法正确的是 A.酶被固定在不溶于水的载体上，可反复利用 B. 酶作为催化剂，反应前后结构不改变，所以固定化酶可永远利用下去 C.酶由于被固定在载体上，所以丧失了其高效性和专一性 D.被固定化的酶其活性部位完整，所以不受高温、强碱、强酸等条件影响 2.下列关于固