第十一章 荧光分析法课件.ppt

* 48-* 在不同pH值时，具酸或碱性基团的有机物结构可能发生变化；无机荧光物质，影响其稳定性。 具荧光性的金属有机配合物也受pH的影响 3、pH值： * 48-* 指荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子相互作用引起荧光强度降低或消失的现象。 熄灭剂：卤素离子、重金属离子、氧分子、硝基化合物、重氮化合物、羰基羧基化合物等。 荧光熄灭的形式： ?碰撞猝灭；?转化为无荧光物质；?转入三重态的熄灭，引入溴、碘、氧；?电子转移猝灭；?浓度较大产生自熄灭。 荧光熄灭法: 利用加入熄灭剂后，其荧光强度的减少与荧光熄灭剂的浓度呈线性关系测定荧光熄灭剂含量的方法。 4、荧光熄灭与熄灭剂 * 48-* 瑞利光：与物质分子发生弹性碰撞，不发生能量交换只改变方向的散射光。 拉曼光：与物质分子发生非弹性碰撞，既有能量交换又改变方向的散射光。 干扰及消除： 散射光尤其是比入射光波长更长的拉曼光干扰较大。消除方法：选择适当的激发波长避开拉曼光。 常见溶剂拉曼光如表11-2 5、散射光的影响 * 48-* 一、荧光强度与物质浓度的关系 二、定量分析方法 三、荧光分析条件的选择 第二节 荧光定量分析方法 * 48-* 一、荧光强度与物质浓度的关系 1、荧光的检测：检测器与激发光垂直 ※注意：该公式的近似处理条件Ecl≤0.05 2、荧光强度和物质浓度的关系： * 48-* 荧光分析法比UV分析法更加灵敏 荧光分析法在很弱的背景上直接测定荧光强度，其灵敏度取决于检测器的灵敏度，测定溶液的浓度更稀； 紫外可见分析法通过测定入射光和透过光的光强比值，浓度很低时检测器很难检测到微小的光强差，信号放大而比值不变，灵敏度仍不能提高。 * 48-* 1、校正曲线法： 2、比例关系法： 当校正曲线通过原点时，可选择其线性范围，用比例法进行测定。空白不能调零： (Fs –F0) ︰ (F x-F0) = Cs:Cx 求 Cx F0为空白溶液的荧光强度。 3、联立方程式法 : 用于多组分混合样品含量测定，同UV。 二、定量分析方法 * 48-* 三、荧光分析条件的选择 （1）样品浓度的选择 稀浓度，10-5μg/ml～100μg/ml 吸光度A0.05时，将向浓度轴偏离。 （2）激发光波长和荧光波长的选择 若无散射光干扰，一般选最大激发波长为激发光 最大荧光波长为荧光的测定波长，测定的灵敏度最高。 F c * 48-* （3）散射光干扰及消除干扰的消除 改变激发光的波长； 更换溶剂； 采用适当的复合滤光片或调整狭缝宽度以减弱散射光。 F c * 48-* 第三节 荧光分光光度计和其他荧光技术 1575年，西班牙医生N.Monardes发现。 1852年，Sir George Stokes对荧光产生的机理作了解释，并提出了“荧光”。 1867年，首次用于分析测定。 1928年，Jette和West制备首台光电荧光计 1952年，商品荧光分光光度计出现。 * 48-* 一、荧光分光光度计 I0 It F 氙灯、高压汞灯(或激光） 200-800 nm 光电倍增管 石英 检测器与光路相互垂直 * 48-* 仪器的校正 灵敏度校正：1μg/mL硫酸奎宁对照品溶液。 波长校正： 激发光谱和荧光光谱校正： * 48-* （1）激发荧光分析： 单色性好、选择性好、灵敏度高。 （2）时间分辨荧光分析： 脉冲荧光作为光源，据不同物质荧光寿命不同进行分离。 （3）同步荧光分析： 利用同步荧光峰峰高与物质浓度的正比关系测定样品浓度。 （4）胶束增敏荧光分析： 用胶束对荧光物质有增容、增敏和增稳的作用测定，提高了荧光分析法的灵敏度和稳定性。 二、荧光分析新技术 * 48-* 三、荧光分析的应用 1. 无机化合物 在紫外光照射下会发生荧光的无机化合物很少，主要依赖于有机试剂形成的螯合物。 直接荧光测定法 荧光熄灭法： 测定某些元素虽然不与有机试剂形成发荧光的配合物，但是它会与发荧光的配合物争夺配位体，组成不发荧光的配合，使其产生荧光熄灭，由荧光熄灭的强度此该元素的含量。F、S、Fe、Ag、Co、Ni、Cu、Mo、W * 48-* 催化荧光测定法 某些元素虽然与有机试剂形成发荧光的配合物，但是反应速度慢，在某些微量元素的催化下，反应速度会加快，特定的时间内可测定微量元素。 低温荧光测定法 溶液温度的降低，显著增强溶液的荧光强度。液氮－196℃ 较常测定的元素有：Ce、Sm、Tb 等稀土元素 　　　　　　　　　Sb、V、Pb、Bi、Nb、Mn 固体荧光测定法 固体荧光发在荧光分析中也经常用到。 * 48-* 2、 有机化合物与生物分子：芳香族 待测物 试剂 λ exmax λemmax 测定范围 ppm 丙三醇 苯胺 紫外 蓝色 0.1~2