侯志源中期报告.docVIP

河北工业大学2011届本科毕业论文中期报告 毕业论文题目： 头孢霉胞外多糖的特性研究 适用专业： 生物工程 学生信息：学号：071279 、姓名：侯志源 、班级： 生物072 指导教师信息：姓名： 董庆霖 、职称： 教授 提交日期：2011-5-8 真菌是一个分布广泛、类群庞大的生物门类，它是指营异养生活、不含光合色素、以孢子形式繁殖、具有由纤维素或几丁质构成的细胞壁的真核生物类群，形态通常为单细胞丝状体或丝状体组成的菌丝体。内生真菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物的各种组织和器官内部的真菌和细菌。内生菌作为一种新的微生物资源引起广泛的关注，从内生菌中寻找新的活性化合物是内生菌研究的一个热点。内生真菌是一个庞大的真菌类群，几乎在所有植物组织中都发现有内生真菌的存在，但在藻类中发现的内生真菌却不多。该菌是藻类新发现的内生真菌，所以内生真菌是一类有广阔应用前景的资源微生物。生真菌代谢产物的研究对于阐明生物进行的机制，加深对生物体之间关系的了解以及丰富真菌多样性有重要的意义。本课题初步对一种藻类内生真菌（半知菌、尚未鉴定）代谢产物进行分离纯化和定性研究，看是否能发现新的物质，有一定的研究价值。 现已初步确定此真菌的主要产物之一是一种（或几种）多糖，近年来在多糖化合物的研究中发现, 来自真菌的多糖化合物具有很强的生物活性, 如具有调节免疫功能及抗肿瘤作用。近20 年来, 已有大量关于真菌多糖生物活性的研究报道, 主要集中在免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗突变、抗衰老、降血脂、抗溃疡和抗氧化等方面。多糖具有多方面的生物活性, 对正常细胞则影响很小。大多数真菌多糖易被生物降解, 没有直接细胞毒性, 在临床上静注、口服等多种给药途径基本无副作用。许多真菌多糖甚至可以长期服用, 以达到防治肿瘤的目的。真菌多糖是一种很好的广谱免疫增强剂。因此, 多糖在生物医药、保健食品、环保领域、农业生产和化妆品等方面具有独特的应用价值。 真菌多糖具有丰富的生物活性, 且无毒副作用,是目前最有开发前途的保健食品和药物新资源。有许多真菌多糖被用作保健食品的功能添加剂, 如真菌多糖啤酒已在我国问世。多种真菌多糖在临床上也被广泛应用, 并在自身免疫性疾病、免疫功能低下症和肿瘤的治疗等方面取得了令人鼓舞的效果。真菌多糖资源极为丰富, 其粗制品比较容易制备, 这就为扩大研究提供了方便, 因此, 可以说真菌多糖的开发利用潜力是很大的, 应用前景也极为广阔。目前, 国内外对真菌多糖的开发利用发展得很快。 实验材料，试剂和仪器 1.1实验材料 头孢霉，大肠杆菌，霉菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌 1.2试剂 95%乙醇，酵母膏，NaNO3，蛋白胨，NaCl，琼脂，K2HPO4，土豆，葡萄糖， KCl，蔗糖，MgSO4·7H2O，FeSO4，无水醋酸钠，冰醋酸，二甲酚橙，乙二胺四乙酸二钠 1.3实验仪器 LG10-2.4A高速离心机 北京格拉威尔科技有限公祠 722N可见光分光光度仪 上海菁华科技仪器有限公司 电子天平 上海精科 真空冷冻干燥器 北京博区康技术公司 光照培养箱 宁波市科技园区新江南仪器有限公司 廻转式恒温调速摇瓶柜 上海欣蕊自动化设备有限公司 自动张力仪 承德试验机有限责任公司 近阶段所做实验 2.1培养基的配制及抑菌实验 2.1.1大肠杆菌选用牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，NaCl 0.5g，琼脂1.8g，水100ml，PH7.0,121℃灭菌20min 吸取大肠杆菌菌液30μl与6ml无菌水混匀后倒入30ml的培养基中混合均匀，倒入平皿中，待凝固后，在平皿中均匀打8个小洞，在其中三个小洞中打入130μl的多糖溶液，重复三次，取平均值。放入冰箱中扩散12个小时，放入培养箱中恒温倒置，37℃ 实验结果如图所示： 由图片可知此多糖对大肠杆菌没有抑制作用 2.1.2金黄色葡萄球菌选用LB培养基 酵母膏0.3g，蛋白胨1.0g，NaCl 0.5g，琼脂1.8g，水100ml，PH7.0,121℃ 吸取金黄色葡萄球菌液30μl与6ml无菌水混匀后倒入30ml的培养基中混合均匀，倒入平皿中，待凝固后，在平皿中均匀打8个小洞，在其中三个小洞中打入130μl的多糖溶液，重复三次，取平均值。放入冰箱中扩散12个小时，放入培养箱中恒温倒置，37℃ 实验结果如图所示 由图片可知此多糖对金黄色葡萄球菌没有抑制作用。 2.1.3霉菌用PDA培养基 土豆20g，葡萄糖2g，琼脂2g，水100ml，PH自然，121℃ 从霉菌的斜面上去一环菌与6ml无菌水混合均匀，倒入培养基中混匀倒入平皿中，待凝固后，在平皿中均匀打8个小洞，在其中三个小洞中打入130μl的多糖溶液，重复三次，取平均值。放入