第三章—蛋白质研究技术应用.pptVIP

（一）、蛋白质测序策略 (9)确定原多肽链中二硫键的位置。 蛋白质顺序测定的基本战略 将肽段顺序进行叠联以确定完整的顺序 将肽段分离并测出顺序 专一性裂解 末端氨基酸测定 二硫键拆开 纯蛋白质 胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链（最适pH约2，此时二硫键不断开）（在二硫键保持完整的条件下，将蛋白质特异切割成肽段。） 经电泳分离各肽段 用过甲酸断开二硫键，含有-S-S-的肽段带电性质发生变化，转向90℃二次电泳，曾含二硫键的肽段迁移率发生变化 然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置 二硫键位置的确定 二硫键位置的确定 对角线电泳 Sanger反应 1、 末端分析 ? 二硝基氟苯（DNFB）法 O 2 N F N O 2 + H 2 N C H C R O H N C H C R O O 2 N N O 2 H + H 2 O O 2 N N O 2 H N C H C R O O H + 氨基酸 DNFB N-端氨基酸 DNP衍生物 DNP-氨基酸 末端氨基酸残基的鉴定 N 二硝基苯衍生物 黄色 二甲氨基萘磺酰-AA有强荧光，检测灵敏度高 ? 丹磺酰氯（DNS）法 末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析 1 N (DNS-aa) ?苯异硫氰酸酯法（PITC法、Edman降解法） 末端氨基酸残基的鉴定 、 末端分析 1 N —N=C=S +