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具体分为四步: ①、根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平,列出因子水平表; ②、根据因子和水平数选用合适的正交表,设计正交表头,并安排实验; ③、根据正交表给出的实验方案,进行实验; ④、对实验结果进行分析,选出较优的实验条件以及对结果有显著影响因子。 举例: 确定赖氨酸产生菌FB31发酵培养基成分玉米浆、豆饼水解液、硫酸铵适宜浓度及其对发酵的影响。 解: 利用正交设计安排实验并分析结果。 (1)、确定因子和水平,列出因子水平表根据经验,豆饼水解液、玉米浆和硫酸铵的浓度变化见表,共3个因子每个因子取三个水平。 K1,k2,k3之间的差异是由于各因子取三个不同的水平导致. (3) 实验结果及分析 正交实验结果的统计分析方法有极差分析法与方差分析法两种。 2、 响应面分析法 虽然正交实验设计是多因子实验安排中最常用的实验设计方法,其他实验设计方法还有很多,特别是一些实验方法结合计算机统计分析软件,使实验的安排和对结果的分析较正交设计更加完善和方便,这里我们仅仅举响应面分析法作一介绍。 响应面分析(response surface andysis)方法是数学与统计学相结合的产物,和其他统计方法一样,由于采用了合理的实验设计,能以最经济的方式,用很少的实验数量和时间对实验进行全面研究,科学地提供局部与整体的关系,从而取得明确的、有目的的结论。 与“正交设计法”不同,响应面分析方法以回归方法作为函数估算的工具,将多因子实验中因子与实验结果的相互关系,用多项式近似,把因子与实验结果(响应值)的关系函数化,依此可对函数的面进行分析,研究因子与响应值之间、因子与因子之间的相互关系,并进行优化。 Box及其合作者于20世纪50年代完善了响应面方法学,后广泛应用于化学、化工、农业、机械工业等领域。 * * 第三节 培养基的设计与优化 培养基设计与优化的任务: 、确定最佳成分组成 、确定各成分的最佳配比 、确定最佳pH 、确定最佳配制工艺 培养基中影响菌体生长和产物形成的因素: 培养基组成(包括原料来源与加工方法) 配比 缓冲能力 黏度 消毒是否彻底 消毒对营养的破坏程度 原料的杂质 目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合培养基配方,只能用生化、细胞生物学、微生物学等的基本理论,参照前人经验配方,再结合所用菌种和产品的特性,按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。 一、 培养基成分选择的原则 (一) 菌种的同化能力 选用大分子原料时,应首先考虑微生物是否具有相应的水解酶。否则,只能利用简单物质。 例如:酵母菌最多只能利用2-3糖,不能利用淀粉等多糖。所以酿酒等工业必须先将淀粉质原料糖化。 葡萄糖是最容易利用的碳源,但价格较高。 工业上一般用淀粉水解糖。 淀粉水解糖: 主要成分: 葡萄糖 次要成分: 二糖、三糖等低聚糖;脂肪、蛋白等杂质。 低聚糖存在的危害: 降低原料利用率;抑制微生物生长;降低发酵液可发酵营养成分;增加黏度 影响淀粉水解糖质量的因素: 原料质量; 水解工艺与设备。 淀粉水解糖制备工艺: 酸法;酶法。 许多微生物缺乏蛋白酶,不能直接利用蛋白质等作氮源, 可先将蛋白质人工水解为氨基酸液。 常用的蛋白质水解液: 棉籽饼水解液 血蛋白水解液 豆饼水解液 在配制培养基时,应根据微生物的特性和培养目的,注意快速利用的碳(氮)源和慢速利用的碳(氮)源的相互配合,发挥各自的优势,避其所短。 (二) 代谢的阻遏与诱导 例1: 速效碳源葡萄糖被菌体利用时产生的分解代谢产物会阻遏或抑制某些产物合成所需的酶系的形成或酶的活性,即发生葡萄糖效应。 因此,抗生素发酵时,种子培养基所含的速效碳氮源往往比作为发酵培养基多。 孢子培养基的营养不能太丰富(特别是有机氮源),否则只长营养菌丝而不产孢子。无机盐浓度要适量,不然会影响孢子量和孢子颜色。 例2: 酶制剂生产:应考虑碳源的分解代谢阻遏的影响,对许多诱导酶来说,易被利用的碳源不利于产酶,而难被利用的碳源(如淀粉、糊精等)对产酶是有利的。 因而淀粉糊精等多糖也是常用的碳源,特别是在酶制剂生产中几乎都选用淀粉类原料作为碳源。 例3: 微生物利用氮源的能力因菌种、菌龄不同而有差异。 能分泌蛋白酶的菌株,在有机氮源上可很好生长。
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