vonkossa钙组织切片的制作初探资料.pdf

技 术 交 流 08/2005 VonKossa钙组织切片的制作初探 赫晓燕 董彦君 曹 靖 白建 （山西农业大学动物科技学院，山西 太谷，030801） 摘要：本文主要针对一些特殊的组织进行钙的观察。采用的是特殊的染色方法，即VonKossa染色法。从组 织的取材、固定、脱水、透蜡、浸蜡、包埋到切片、展片、贴片、烤片、染片以及封片，综述了整个切片制作的全过 程。为关于钙方面的切片的制作提供了有力的依据，值得借鉴与共享。 关键词：VonKossa；切片制作 现今对钙的研究实验不少，其组 性，在各级浓度酒精中逐渐吸取组织 织为单位，用小刀切离。切时应顺势 织切片要经过特殊的染色分析。下面 中的水分。但要注意，酒精也可以不 切开，不要用力过猛，以防止压碎蜡 主要通过特殊染色方法 VonKossa 断吸取空气中的水分，尤其是无水酒 块而损伤组织。切下的组织蜡块，大 染色法来分析组织钙的吸收情况。 精吸水性更强，所以除在无水酒精瓶 体应修正成矩形，组织的周围须留 1.取材 内加无水硫酸铜或氧化钙吸水外，最 1-2mm宽的蜡边。蜡块四边不垂直， 本实验主要取小鼠的脾。主要分 好以双盖瓶存放，以维持其对组织的 作连续切片时，切片带易呈弯曲状， 析免疫力如何，以及对钙的吸收情 脱水性能。 影响展片和粘片；组织周围不留蜡 况。于10%的甲醛溶液固定24h。 透明过程，是以二甲苯换取组织 边，或留得很少，则切片不易连续。下 酒精 二甲苯 石蜡法脱水包埋 内的无水酒精，所以二甲苯用久了， 图为修整合适的蜡块。 2. - - 就会含有较多的酒精，而妨碍组织的 透明及浸蜡。因此一般应通过两次二 甲苯。通过二甲苯后，若心、肝、肾、肌 肉等组织呈暗红褐色或暗红色浸油 3.2切片操作 状态，结缔组织、神经组织等呈淡黄 将上述蜡块夹于切片机的组织 色完全透明，则说明脱水透明良好。 固定器上，使组织块的横径与刀刃相 如果组织进入二甲苯20min以后还 平行或成45°角（即横切，尤其是皮 不变色，或中心有白色，说明水没脱 肤、胃肠壁必须横切）。把刀固定在 净，应返回无水酒精继续脱水。 刀架内，调好角度，一般在4-6度间， 组织的脱水透明时间，应根据脱 角度太小，则刀刃切不到组织，角度 水剂及透明剂的新旧程度及组织块 太大，只切到一些碎隙。但如果切较 的大小和种类等，在实践过程中酌情 硬的组织，角度需大些。刀的角度还 增减。脱水、透明时间过久，尤其在高 需要看刀刃的磨灭程度，如刀使用过 浓度酒精或二甲苯中过久，则使组织 久，刀刃角度改变，切片刀角度则应 块过度硬脆，影响切片。 根据经验而调整。 包埋，就是将浸透包埋剂的组织 块，与包埋剂铸在一起。包埋用的石 蜡，有熔点在45-62℃之间的各种类 上述各级酒精为脱水剂；二甲苯 型。包埋用的石蜡可自然冷却凝固，或 是一种具有挥发性的无色透明液体， 等表面凝固后浸入冷水，加快凝固。 既能溶于酒精，又能溶解石蜡，在此 切片