淀碘-碘化钾测定淀粉含量.docx

实验六：碘-淀粉比色法测淀粉含量 一、实验原理 对于淀粉含量较少的植株样品，也可采用碘–淀粉比色法。淀粉在加热情况下能溶于硝酸钙溶液中，当碘化钾和硝酸钙共存时，碘能以碘–淀粉蓝色化合物沉淀全部淀粉。将此沉淀溶于碱液，并在酸性条件下与碘作用形成蓝色溶液进行比色。 二、试剂 1．80％硝酸钙溶液。 2．0.5％碘液：称5.00g结晶碘和10.00g碘化钾，放入研钵混合干研，然后加10mL蒸馏水研至全部碘溶解，将溶液全部转入1000mL容量瓶定容后，贮于磨口试剂瓶。 3．5％含碘硝酸钙溶液：取10mL 80％的硝酸钙溶液，加入160mL水再加入3mL 0.5％的碘液混匀，现用现配。 4．标准淀粉溶液：称取纯淀粉50mg于研钵中，加3mL 80％硝酸钙溶液，研细并转移到100mL的三角瓶中，用15mL 80％的硝酸钙溶液冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中。将三角瓶置于沸水浴中煮沸5min，冷却后全部转入50mL容量瓶中并定容。此液为1mg/mL的淀粉标准液。 5．0.1mol/L NaOH。 6．0.1mol/L HCl。 三、材料与方法 绘制标准曲线取标准淀粉溶液：取7支管，编号，按下表顺序加入各试剂，混匀静置15min后离心，其他操作同样品测定步骤，显色后在590nm波长下测定光密度。以光密度为横坐标，淀粉含量为纵坐标绘制标准曲线。 管号 1 2 3 4 5 6 7 标准淀粉溶液（ml） 0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 80%硝酸钙溶液（ml） 5.0 4.5 4.0 3.0 2.0 1.0 0 0.5%碘液（ml） 2 每管淀粉含量（mg） 0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 称取1～3g叶片，剪碎放入研钵，加5mL 80％的硝酸钙溶液，研磨成糊状移入100mL的三角瓶中，用10mL 80％的硝酸钙冲洗研钵，无损地收集于三角瓶中，瓶口盖上小漏斗，在沸水浴上煮沸3～5min（叶片含淀粉少的3min，含淀粉多的5min），使样品中淀粉转变为胶体溶液。 给三角瓶中加20mL蒸馏水，混合液转入离心管中离心（2000～3000rpm）2～3min，将离心后的淀粉胶体浑浊液移入100mL容量瓶（淀粉含量少时，可移入50mL容量瓶），三角瓶及离心沉淀物用5～10mL热蒸馏水冲洗并同样离心，离心液并入容量瓶中（共洗2～3次）定容，即为淀粉提取液。 取5～10mL淀粉待测液，加入到盛有2mL 0.5％碘液的离心管中，混匀静置15min后离心（3000rpm）5min，弃上清液。沉淀用5％的含碘硝酸钙溶液冲洗两次，向冲洗后的沉淀中加入10mL 0.1mol/L的NaOH混匀，将离心管浸入沸水内5min，使沉淀溶解。将溶液转入50mL容量瓶中，加入0.3mL 0.5％碘液，用30mL左右的水冲洗并入容量瓶，加入2mL 1mol/L的盐酸，用水定容并显色，在590nm波长处测定光密度。 四、结果处理 C：从标准曲线查得淀粉量，mg。 VT：样品提取液总体积,mL。 V1：显色时取样品液量，mL。 W：样品重（g）。