少突胶质前体细胞对脊髓伤治疗作用的实验研究.docVIP

PAGE PAGE 1 少突胶质前体细胞对脊髓伤治疗作用的实验研究 　　摘要：采用Allens重物撞击法建立小鼠SCI模型，致小鼠脊髓损伤。体外分离、培养和纯化GFP转基因鼠的OPCs。同时，对OPCs进行诱导分化。通过眶静脉将OPCs移植到脊髓损伤模型鼠体内。体外实验证明分离、培养并纯化的OPCs具有自我增殖的能力，并且可以分化为少突胶质细胞。移植后的OPCs不仅可以与宿主脊髓组织较好的整合，并可迁移到损伤部位，替代损伤组织。 　　1.材料与方法. 　　1.1材料 　　主要试剂为DMEM/F12（1：1）培养基，bFGF、PDGF。胰蛋白酶、胎牛血清、胎盘蓝染液、硫瑾染液、EDTA、多聚赖氨酸。抗体A2B5、O4、Cy3、Alax488、DAPI和PI。C57BL/6小鼠，B6C3-Tg（EGFP）加强型绿色荧光蛋白转基因。 　　1.2方法 　　皮层混合细胞培养：在解剖显微镜下，取0～2d新生的B6C3-Tg（EGFP）绿色荧光蛋白转基因小鼠，断头后迅速取出鼠脑，清除脑膜，分离双侧大脑皮质，置于预冷的D-Hanks液中漂洗2次，转入含无血清DMEM/F12培养液的离心管内，用巴氏吸管反复吹打至组织块基本消失，200目不锈钢筛网过滤，取滤液以1500rpm，离心5min。收集沉淀，加入完全培养液（DMEM/F12、10%FBS、1%双抗）1ml，用吸管吹打制成细胞悬液，计数