聚乙二醇诱导细胞融合影响因素探究.pdfVIP

第 29 卷第 5 期 菏 泽 学 院 学 报 2007 年 10 月 　　　　　　　　　　 　 　　　　 　　　　　　　 Vol . 29 　No . 5 Journal of Heze University Oct . 　2007 ( ) 文章编号 :1673 - 2103 2007 05 - 0079 - 04 聚乙二醇诱导细胞融合影响因素探究 李秀兰 ,姜曰水 ( 曲阜师范大学生命科学学院 ,山东曲阜 273165) ( ) 　　摘 　要 : 以鸡红血细胞为材料 ,聚乙二醇 M r = 4 000 为诱导剂 ,研究不同的细胞密度 、聚乙二醇体积分 2 + ( ) 4 数 、Ca 浓度等因素对细胞融合率的影响 ,结果显示 :细胞密度为 3 . 0～4 . 0 ×10 / mL ,聚乙二醇的体积分数 为 50 % ,Ca2 + 浓度为 50mmol/ mL 时融合效果最好 ,融合率高达 29 . 76 %. 关键词 :鸡红血细胞 ;细胞密度 ;聚乙二醇 ;融合率 中图分类号 :Q 2 　　文献标识码 :A 　　自从20 世纪70 年代 Kao 和Michayluk 用聚乙二 8g , KCl 0 . 4g , Na HPO ·2H O 1. 77g , NaH PO ·2H O 2 4 2 2 4 2 ( ) ) 醇 PEG ,polyethylene glycol 诱导大麦 、大豆等植物原 0 . 69g , 葡萄糖 2g , 溶于 1 000mL 蒸馏水中 的体积 生质体融合后[ 1] ,PEG 法诱导细胞融合以其容易制 比,配制不同体积分数的 PEG 溶液 ,通过控制 CaCl2 备 、活性稳定 、不需要特别的仪器设备 、操作简便等 的量调节 Ca2 + 浓度. 优点 , 被普遍地应用于生物 、遗传 、医药等研究领 1. 2 . 2 　细胞融合 域[2～5 ] . 高体积分数 、高相对分子质量的 PEG 会对 细胞融合的具体操作过程参照徐承水等的方 细胞产生毒性 ,是限制其被广泛应用的瓶颈 ,此外 , 法[7 ] . 由于该方法涉及的影响因素较多[6 ] ,进一步加大了 1. 2 . 3 　融合细胞的观察 获得理想细胞融合率的难度 ,且 PEG 法诱导细胞融 取细胞融合液进行滴片 ,在显微镜下观察不同 合的影响因素尚未见详细报道. 为此我们以鸡红血 视野内细胞总数及融合细胞数 ,用细胞计数法统计 细胞为材料 , 探讨不 同细胞密度 、PEG 体积分数 、 总融合率 ,每一处理连续重复 3 次 ,每次统计取 5 个 Ca2 + 浓度和 p H 对细胞融合率的影响 , 以期确定获