超临界CO2萃取蜘蛛香中缬草素工艺优化.docVIP

PAGE PAGE 1 超临界CO2萃取蜘蛛香中缬草素工艺优化 　　摘要：探讨超临界CO2萃取蜘蛛香（ValerianajatamansiJones.）中缬草素工艺条件的优化，采用响应曲面法考察萃取压力、萃取温度、萃取时间对缬草素收率的影响。结果表明，优化的萃取条件为萃取压力28MPa、萃取温度44℃、萃取时间49min，此条件下缬草素收率为1.88%。 　　关键词：蜘蛛香（ValerianajatamansiJones.）；缬草素；超临界CO2萃取；响应曲面法 　　中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）08-1901-02 　　缬草素（Valtrate）是构成缬草疗效的有效成分，也是各种缬草共有的特征性化合物，具有镇静催眠、抗焦虑、抗病毒、抗胃癌、解痉、舒张血管等多种药理作用[1-7]。缬草素属环烯醚萜类，化学性质不稳定，在过酸、过碱、过热环境下易发生羟醛缩合反应生成半缩醛羟基，使其得率和生物活性降低；其提取方法主要有冷浸、渗漉、二氯甲烷索氏提取和超声波辅助提取等，尚存在溶剂用量大、提取时间长等缺点[8，9]。超临界CO2萃取技术具有步骤简单、选择分离效果好、提取率高、产物无溶剂残留、有利于热敏性物质的萃取等优点。蜘蛛香（ValerianajatamansiJones.）为败酱科缬草属植物，以干燥茎及根入药，是目前惟一被2010年版《中华人民共和国药典》收载的缬草类生药，其缬草素含量远高于同属其他缬草植物，是制备缬草素的主要原料[10，11]。研究采用响应曲面法对超临界CO2萃取蜘蛛香中缬草素工艺进行优化，寻找最佳工艺条件，为进一步分离纯化缬草素打下基础。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　蜘蛛香采自贵州省关岭县，自然阴干后粉碎过60目筛备用。缬草素标准品购自四川维克奇生物科技公司，甲醇、乙腈均为分析纯。4L超临界萃取装置为自行研制，HP1100高效液相色谱仪购自美国惠普公司。 　　1.2方法 　　1.2.1缬草素的萃取采用Box-Behnken响应曲面设计法，以萃取压力、萃取温度、萃取时间为自变量，以缬草素收率（y）为响应指标设计三因素三水平试验方案，试验因素与水平见表1。取蜘蛛香粉200g置于超临界萃取装置，设定解析压力为5MPa，解析温度为55℃，CO2流量为20L/h，当达到预定温压条件，泵入CO2萃取一定时间得黄褐色油状物。 　　1.2.2缬草素含量的测定参考文献[11]。标准品的配制：取缬草素标准品适量，用甲醇溶解配制成0.15mg/mL的标准溶液。样品的配制：取蜘蛛香超临界萃取物10mg，用甲醇溶解、定容至25mL。色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水（60∶40，V/V），流速为1.0mL/min，检测波长为256nm，柱温为室温，进样量为20μL。以标准品的保留时间和峰面积定性、定量测定样品中的缬草素，并计算缬草素收率（y）。y=[萃取物中缬草素质量（g）/原料质量（g）]×100%。 　　2结果与分析 　　2.1试验结果及模型方程的建立 　　缬草素的超临界CO2提取响应曲面试验设计方案与试验结果见表2。 　　利用Minitab16软件对表2试验数据进行多元回归拟合，得响应曲面二次多元回归模型：■= 　　-1.75664+0.10029x1+0.08475x2+0.01624x3-0.00145x12-0.00090x22-0.00011x32-0.00019x1x2-0.00020x1x3+0.00004x2x3。 　　对该模型进行方差分析，结果见表3，回归系数显著性检验结果见表4。由表3可知，模型P=0.0010.05，不显著，R2=0.9765说明该模型拟合程度良好，试验误差小，可以用此模型对缬草素的超临界CO2提取进行分析和预测。由表4可知，模型中一次项x1及x2、二次项x12及x22极显著，其他项均不显著。 　　2.2响应曲面分析与优化 　　根据回归模型作出响应曲面见图1、图2、图3。由图1至图3可知，萃取压力对缬草素收率的影响最大，表现为曲面较陡，萃取温度影响次之，萃取时间相对影响最小。 　　经软件优化得到缬草素最佳提取工艺条件为萃取压力28.22MPa、萃取温度43.89℃、萃取时间49.09min。为检验响应曲面法所得结果的可靠性，采用上述优化的提取条件进行缬草素的超临界CO2提取，为方便实际操作将提取工艺参数修正为萃取压力28MPa、萃取温度44℃、萃取时间49min，此条件下缬草素收率为1.92%。验证试验结果表明，缬草素收率为1.88%，与理论预测值非常接近，表明基于响应曲面法获得的优化提取工艺参数准确可靠，具有实用价值。 　　3结论 　　通过响应曲面法建立了缬草素收率与萃取压力、萃取温度、萃取时间关系的回归模型，检验试验证明