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实验技术问答题 1、 移液器的正确使用方法 答：（1）要根据移液体积选择合适的移液器。在调整取液量的旋钮时，不耍用力过猛，并应 注意计数器显示的数字不要超过其可调范围， ⑵将移液器垂直插入吸头后，并左右微微转动上紧。严禁上下敲击。 ⑶垂直吸液,婆将吸头插入液体一定的深度（约在液面3毫米以下），然后缓慢平稳地 松开按钮，吸进液体，等一?秒钟，然后将吸头提离液血，贴壁停留2-3秒，使管尖外 侧的液滴滑落。 （4） 放液时将吸头口贴到容器内壁底部并保持一定倾斜。压住按钮排出液体。排空液体 后继续压住按钮并同时提起移液器，使吸头贴容器壁擦过。最后松开按钮按吸头弹射 器除去吸头。 （5） 对于较粘稠的液体nJ预吸一次，将枪头浸润后，再开始吸液。 2、 在细胞培养箱中通入二氧化碳的作用是什么？是否培养任何细胞吋都必须保持培养箱中 二氧化碳的浓度为5%o 答：在细胞培养箱中通入二氧化碳的作用是维持培养液中pH值的相对稳定 大多数细胞所需pH在7. 2-7. 4.但是，细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不 同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH （7.4 - 7.7）,而传代转化细胞系则需要偏酸 pH （7.0 - 7.4）-般培养基屮人都使用HC03-/C032-/H+作为pH的缓冲系统，而培 养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3为每 升1.97 g吋，则应使用5 % CO2培养细胞 3、 为何培养基保存于4 ° C冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越來越偏碱性？ 答：培养基保存于4 ° C冰箱中，培养基内ZC02会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。 而培养基屮之酸碱指示剂（通常为酚红-酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色） 的颜色也会随碱性增加而更偏昭红。培养基偏碱的结果，将造成细胞生长停滞或死亡。 4、 动物细胞培养的条件有哪些？ 答：⑴无菌无毒的环境； ⑵营养与体内基本相同； ⑶适宜的温度和酸碱度； ⑷气体环境。 5、 在细胞培养过程中,胰酶有什么作用? 答：胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。胰酶对细胞的分离作用与 细胞的种类和细胞的特性冇密切关系。一燉来讲，胰酶浓度大、作用温度高、作用时间 长，对细胞分离能力也人，但超过一定的限度会损伤细胞。胰酶溶液在pHO,温度为 37°C时，作用能力最强。注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力。因 此，胰酶溶液常用无52+、脑2+的D-Hanks,平衡盐溶液配制成0. 25%溶液 6、 用台盼蓝鉴别细胞死活时，为什么活细胞不作色，死细胞核呈蓝色？ 答：因为当细胞死亡吋，染料通过变性的胞膜为解体的细胞核DNA结合，而便其染色。 7、 超净工作台的正确使用 答：⑴使用前应提前30分钟同时开启紫外灯和风机组工作， ⑵当需要调节风机风速时，用工作台操作面板上的风速调节饥进行调节。 ⑶工作台而上禁止存放不必要的物站，工作区内的所有物站均应排放整齐，以免干扰气 流方向。应即时将工作台内的闲置物品撤离出去，并几不得堵住气流的进口以保持工 作区的洁净气流不受干扰。 ⑷禁止在工作台面上记录书写，工作时应尽量避免作明显扰动气流的动作 ⑸使用结束后，用消毒液清理工作台面后打开紫外灯，15?30分钟后关闭紫外灯，关闭 洁净台电源 8、 洁净工作台与生物安全柜的区别？ 答：牛物安全柜与洁净台的主要区别在于生物安全柜主要是保护操作者和环境，也可保护 受试样品并防止交叉污染的发生，生物安全柜是一种负压的净化工作台，结构比洁净台 复杂，操作区气体负压，气体净化示排放； 洁净柜保护操作样品，不保护操作者及环境，操作区处气体正压，操作区外气体直接排 放。 9、 石英比色皿与玻璃比色血有何区别？测定DNA RNA浓度时是否可以使用玻璃比色皿 答：石英比色皿可以让可见波长与紫外波长的光都透过。玻璃比色IIIL不能透过紫外波长的光 测定DNA和RNA浓度时使用的是紫外光，波长为260与280nm,因而不可以使用玻璃比 色皿。 10、 移液器吸头消毒后，放入洁净工作台内是否既可以保持无菌？ 答、洁净工作台不是一个密闭容器，洁净工作台不运行时，台内的洁净程度与洁净工作台所 放置的房间的洁净度相同，如果不是在无菌室内，放置在洁净工作台内的消毒过得移液 器吸头是不能保持无菌的。 11、 如果血液标本泼洒在实验台上，应该如何处置？ 答：血液标木泼洒在实验台上示，应该立即将用布或纸巾覆盖并吸收溢出物。向纸巾上倾倒 适当的消毒剂，并立即覆盖周囤区域（通常可以使用5%漂白剂溶液如84消毒液）。使用 消毒剂时，从溢出区域的外围开始，朝向中心进行处理。作用适当时间后（例如30min）, 清理掉。污染区再次清洁并消毒。 12、 正置与倒直荧光显微镜有何区别？培养的活细胞要在何种显微镜