补充2-蛋白质理化性质.pptVIP

五、蛋白质相对分子量的测定 1.凝胶过滤法测定相对分子质量 Note： 蛋白质分子通过凝胶柱的速度并不直接取决于分子质量，而是分子的半径。 用凝胶过滤法测定分子质量，标准蛋白质（已知Mr）与待测蛋白质必须具有相同的分子形状（球形） 分子形状为线形或能与凝胶发生吸附作用的蛋白质，不能用此法测定。 将已知分子质量的标准物质，在同一凝胶柱上以相同条件进行过滤层析，在一定的范围内，各个组分的洗脱液体积Ve与其分子量的对数成线性关系（反比）： Ve＝－b’ lg MW＋c’ 优点： 设备简单，不要求复杂的仪器 对待测样品的纯度要求不高。待测样品可以是不纯的，只要具有专一的生物活性。 聚丙烯酰胺凝胶：具有三维网状结构和分子筛性质。以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳 普通蛋白质电泳的泳动速率取决于荷质比（净电荷、大小、形状） （二）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS） ■ SDS 在蛋白质表面均匀附上一层负电： SDS（十二烷基磺酸钠），它能够与蛋白质多肽链中的氨基酸残基按大约1 ? 1.4比例结合。 SDS可将蛋白质解离成亚基，所以测出的分子量是亚基的分子量。 SDS－PAGE的依据：物质分子量的差异性 当SDS与蛋白质结合后： 1)SDS使蛋白质分子即带有大量的负电荷，掩盖了蛋白质分子间的电荷差