第六章 食品与细胞工程.pptVIP

 Food Biotechnology 目 录 第一章 绪 论 第二章 食品与基因工程 第三章 食品与蛋白质工程 第四章 食品与酶工程 第五章 食品与发酵工程 第六章 食品与细胞工程 第七章 食品生物工程中的下游过程 第八章 食品生物技术与食品安全检测 第九章 生物技术与食品工业“三废”治理 第六章 食品与细胞工程 第一节 概述 第二节 细胞培养技术 第三节 细胞融合技术及其应用 第四节 细胞拆合及其应用 第五节 动、植物细胞大量培养及应用 第一节 概述 细胞工程（cell engineering）是生物技术的重要组成部分，它是以生物细胞或组织为研究对象，按照预定目标和设计有计划地改变细胞的遗传物质并使之增殖，从而生产有用的细胞生物产品或获得新型生物品种的一门综合性科学技术。 从研究水平而言，细胞工程研究层次可分为细胞水平、组织水平、细胞器水平和基因水平。 细胞工程研究内容包括：细胞大量培养及控制生长技术、组织培养技术、细胞融合技术、细胞拆合技术、染色体导入技术、胚胎和细胞核移植技术及转基因技术等。 细胞工程的核心技术：细胞培养与繁殖 目的：获得新性状、新个体、新物质 组织培养的概念 组织培养这一名词实际上是一个通用名词，习惯上泛指所有的体外培养。根据培养物的不同可概括为三个不同概念：细胞培养、组织培养和器官培养。 A：细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术称为细胞培养。 B：组织培养：将活体的一小片组织放在盛有培养液的玻璃或塑料培养器皿中，待组织块粘着后，沿底面平面移动生长的过程称为组织培养。 从组织块中生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时也发生移动，至使组织培养难以长时间维持其原有结构，结果也就成了细胞培养。 C：器官培养：是指采取某些措施使器官的原基、器官的一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的培养技术。 生物技术上：生产各种生物技术产品如：狂犬病、小儿麻痹 症等病毒疫苗，表皮生长因子及干扰素、白 细胞介素等生长因子及单克隆抗体等。 科学研究上：在病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等方面。 临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某些疾 病的治疗等。 1984年日本的Mitsui石化公司利用紫草的细胞培养生产紫草宁，规模达到750L，产物最终浓度达到1400mg/L。在我国，对于人参中人参皂苷的生物合成研究较为深入。 至今，利用植物细胞工程进行天然产物的生产进入了一个新的发展阶段。 二、植物组织培养 植物组织培养过程 （二）植物细胞工程的理论基础 1958年Steward 和Shantz 培养了来自胡萝卜根韧皮部的细胞，并成功地经液体振荡培养诱导单个的悬浮细胞发育为成熟的胚胎，并得到了完整的小植株，最终开花结果。首次证明了Haberlandt提出的细胞全能学说 （三）培养基 目前，已经研制了多种适宜各种植物细胞培养的培养基配方。常用的培养基有MS、B5、White、Heller、ER、Nitsch、NT等，最常用的是MS培养基，目前Sigma等试剂公司已将基本培养基MS商品化。 （四）愈伤组织和悬浮细胞培养技术 1、愈伤组织和悬浮细胞的制备，愈伤组织是从外植体的离体材料组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞，诱导愈伤组织的外植体可以采自植物的不同器官，幼嫩的根、茎、叶、花或果实都是诱导愈伤组织的好材料，在有些植物上较老的器官和组织也有产生愈伤组织的能力。 2、高表达细胞系的筛选建立 为了获得适合大规模工业化生产用的细胞株，高产细胞系的建立与种质保存技术如图6-1所示。 （五）单细胞培养技术 1、单细胞分离方法 （1）机械法，分离叶肉组织的方法：将叶片轻轻研碎，经过滤和离心，收集和净化细胞。 （2）酶法，单细胞分离的酶法指利用果胶酶、纤维素酶处理植物叶片或其他外植体，使细胞分离的方法。 （3）化学法，单细胞分离的化学法指利用一些化学药剂游离细胞的方法。 2、单细胞培养方法 （1）看护培养 看护培养（nursing culture）是用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增殖的方法。 （图6-2）看护培养方法的优点是简便易行，效果好。 （3）微室培养 微室培养（micro culture）是在人工制造的无菌小室中，将一滴悬浮细胞液培养在少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法，见图6-3。 3、单细胞培养的程序 ，见图6-4所示 （六）提高植物细胞次级代谢产物含