蛋白质、氨基酸理化性质和提取.pptVIP

氨基酸的理化性质 无色晶体，熔点较高（200℃～300℃）水中溶解度各不同，取决于侧链。氨基酸能使水的介电常数增高。氨基酸的晶体是离子晶体。氨基酸是离子化合物。 1、一般物理性质 20种氨基酸，除甘氨酸外，其它氨基酸的α-碳原子均为不对称碳原子。可以有立体异构、有旋光性。氨基酸的构型也是与甘油醛构型比较而确定的。 从蛋白质酶促水解得到的α-氨基酸，都属于L-型，但在生物体中(如细菌)也含有D-型氨基酸。 比旋光度是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据。 氨基酸的旋光性和光吸收 氨基酸的光吸收 构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。 在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。可以通过测定280nm 处的紫外吸收值的方法对蛋白溶液进行定量。 苯丙氨酸的?max＝257nm，?257=2.0x102 酪氨酸的?max＝275nm，?275=1.4x103 色氨酸的?max＝280nm，?280=5.6x103 3、氨基酸的两性性质和等电点 （1）、氨基酸是兼性离子 质子受体和质子供体。 所谓兼性离子是指在同一分子上带有能释放质子的正离子基团和能接受质子的负离子基团。兼性离子本身既是酸又是碱。因此它既可以和酸反应，也可以和碱反应。 实验证明：氨基酸在水溶液中或在晶体状态时，都以兼性离子形式存在。 氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成兼性离子。在兼性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。 在不同的pH条件下，两性离子的状态也随之发生变化。 (2)、氨基酸的pK值和氨基酸解离的关系 (3)、电泳及等电点 带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极移动的现象称为电泳。 等电点(pI，isoelectric point)：使分子处于兼性离子状态，在电场中不迁移(分子的净电荷为零)时溶液的pH值。 每一种氨基酸都有特定的pI ，这是由于各种氨基酸分子上所含有的氨基、羧基等基团的数目以及各种基团的解离程度不同所造成的。 一般一氨基一羧基的氨基酸等电点在pH 6左右，这是由于羧基的解离程度大于氨基，故PI偏酸，碱性氨基酸pI在pH 10左右，酸性氨基酸的pI在pH 3左右。 *氨基酸水溶液中其解离度与溶液的PH有关 向氨基酸溶液中加酸时，羧基接受质子，使氨基酸带正电，加碱时，氨基释放质子，与OH-中和，使氨基酸带负电。 当溶液的pH=pI时，氨基酸以两性离子存在 当溶液的pH＜pI时，氨基酸溶液中正离子占优势 当溶液的pH＞pI时，氨基酸溶液中负离子占优势。 （4）、氨基酸的酸碱滴定 （5)、氨基酸等电点及解离百分数的计算 公式：pH=pK+lg([质子受体]/[质子供体])，可定量计算氨基酸在某一pH条件下的解离百分数。氨基酸等电点pI值是由兼性离子两侧基团的pK值所决定的。 同理对含三个可解离基团的氨基酸来说，只要写出它的电离式，然后取兼性离子两边的pK值的平均值，即得其pI值。 ①氨基的化学反应: ◆与亚硝酸的反应 Van Slyke定氮 ◆与甲醛的反应 氨基滴定 ◆与酰化试剂的反应 氨基保护基 ◆与2,4-二硝基氟苯 (FDNB) 的反应 测序 ◆与Edman试剂 (PITC 苯异硫氢酸酯) 测序 ■与二甲基氨基萘磺酰氯 (DNS-Cl)的反应 测序 4、氨基酸的化学性质 氨基酸的分离分析 分配柱层析：支持剂是一些具有亲水性的不溶性物质，如纤维素、淀粉、硅胶等。 滤纸层析（分配层析） 薄层层析（吸附层析、分配层析） 离子交换层析：阴离子交换树脂-N(CH3)3OH，阳离子交换树脂-SO3H 电泳（纸电泳） 二 氨基酸的鉴定、分离纯化 分配层析的一般原理 分配定律：当一种溶质在两种一定的互不相溶的溶剂中分配时，在一定的温度下达到平衡后，溶质在两相中的浓度比值为一常数。即分配系数（kd）。 　 Kd ＝ CA/ CB 　　 CA ：在A相（动相）中的浓度　 CB ：在B相（静相）中的浓度 物质分配：液－液 固－液 气－液 有效分配系数： Keff=某一物质在A相中的