毒理学致突变作用及检测方法.pptVIP

* * 4、双链断裂修复 复制继续进行，DNA损伤部位存在。是一种耐受过程，一种以容忍损伤继续存在和高突变率情况下，以换取细胞继续生存的耐受过程。 * * 5、交联修复 （1）无误交联修复 （2）易误交联修复 * * （二）遗传因素对致突变作用的影响 环境因素 机体 肿瘤（癌） 先天性：遗传多态性 后天性：不同生活方式 损伤 修复 突变 * * 1、代谢酶遗传多态性 1）氧化代谢酶：主要为细胞色素P450，影响机体对某些化学毒物的敏感性。 CYP1A1，影响多环芳烃等致癌物质活化。 乙醇脱氢酶：先天遗传 和 后天诱导 2）脂酶：如环氧水化酶，参与苯并a芘代谢 3）谷广甘肽硫转移酶，解毒酶系，跟GST-μ肺癌敏感性密切相关 * * 2、修复功能的个体差异 DNA修复酶多态性 （1）O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT） （2）聚（二磷酸腺苷－核糖）多聚酶（PARP） * * 五、观察外源化学物致突变作用的基本方法 （一）观察项目的选择 （二）常用的致突变实验 （三）致突变实验中的一些问题 * * （一）观察项目的选择 1、观察效应终点的类型 遗传终点（genetic endpoint）： 致突变试验的观察终点。 基因突变 染色体畸变 DNA原始损伤 * * ①DNA完整性的改变（形成加合物、断裂、交联） ②DNA重排或交换 ③DNA碱基序列改变 ④染色体完整性改变 ⑤染色体畸变 遗传终点 * * 2、成套的观察项目 遗传毒理学评价程序： （1）试验系统需包括每一类型的遗传学终点； （2）包括多种进化程度不同的物种：原核细胞、低等、高等真核细胞； （3）体内试验与体外试验配合。 比如国际协调委员会对药品的遗传毒性评价建议的检测组合：细菌基因突变试验；体外哺乳动物细胞染色体畸变试验/体外小鼠淋巴瘤细胞tk试验；体内啮齿类造血细胞染色体损伤试验 * * 二、常用的致突变试验 1、细菌回复突变试验（Ames 试验） 2、哺乳动物体细胞株突变试验 3、染色体畸变分析 4、微核试验 5、显性致死试验 6、果蝇伴性隐性致死试验 7、姐妹染色单体交换试验 8、程序外DNA合成试验 9、单细胞凝胶电泳试验（彗星试验） 体外基因突变实验 细胞遗传学实验 体内基因突变实验 DNA损伤实验 * * 1、细菌回复突变试验（Ames） Ames BN，1979年建立 鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌 利用突变体的测试菌株，观察受试物能否纠正或补偿突变体所携带的突变改变，判断其致突变性。 * * 原理： 人工诱变的突变株在组氨酸操纵子中有一个突变，突变的菌株必需依赖外源性组氨酸才能生长，而在无组氨酸的培养基上不能存活，致突变物可使其基因发生回复突变，使它在缺乏组氨酸的培养基上也能生长。 * * 试验用菌株：TA100、TA98、TA97、TA102。 试验方法：平板掺入法、点试法、预 培养法。 * * 2、哺乳动物体细胞株突变试验 正向突变试验（野生型基因失活的突变 常用细胞株： 中国地鼠肺细胞V79、中国地鼠卵巢细胞CHO、小鼠淋巴瘤细胞L5178Y 中国地鼠肺细胞V79、中国地鼠卵巢细胞CHO：缺乏利用嘌呤碱的一种酶HGPRT 小鼠淋巴瘤细胞L5178Y：缺乏胸苷激酶TK * * 3、染色体畸变分析 遗传终点： 染色体完整性改变 染色体分离改变 裂隙、断裂、无着丝粒环、染色体环、双或多着丝粒染色体、射体、染色体粉碎 * * 4、微核试验（micronucleus test,MNT） 微核：与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质内，比主核小，故称微核。 * * 微核来源 1、断片或无着丝粒染色体在细胞分裂后期不能定向移动，而遗留在细胞质中； 2、个别染色体或带着丝粒的染色体环和断片在细胞分裂后期被遗留在细胞质中。 * * 观察受试物是否导致细胞内产生微核。 遗传学终点 DNA断裂剂、非整倍体诱变剂 传统方法：小鼠体内骨髓多染红细胞(PCE)微核试验 改进方法：体外微核试验，CHO/CHL/V79；周围血微核试验；双核细胞法；免疫荧光染色法 * * 5、显性致死试验 显性致死突变：指哺乳动物生殖细胞染色体发生结构和数目变化，出现的受精卵在着床前死亡和胚胎早期死亡。多是雄鼠接触受试物。 平均受孕率=受孕母鼠总数/同笼母鼠总数 X 100% 平均着床率=总着床数早死,迟死,吸收,活胎/受孕母鼠总数 平均活胎率=活胎总数/受孕母鼠总数 着床前死率=（黄体数-早床数）/黄体数 * * 受试动物：小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、果蝇 优点：体内试验，不需要特殊