肿瘤诊断方法进展.pptVIP

* * William Cho * * William Cho * William Cho * * William Cho * * 通过对患者的基因位点进行检测，能进一步确定对特定药物具有很强敏感性或抵抗性的患病人群，从而指导临床开出适合不同个体的处方，使患者既能获得最佳治疗效果，又能避免药物的不良反应，达到个体化用药的目的。 * * William Cho * William Cho * William Cho * William Cho 90%的癌症死于血行转移。 Notes are for internal training use only * TUNEL：Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) FISH: Fluorescence in situ hybridization Allele等位基因 CGH: 比较基因组杂交(Comparative Genomic Hybridization) SNP-单核苷酸多态性(SNP) 全称Single Nucleotide Polymorphisms MicroRNA（miRNA,微RNA）即为长度为22nt左右的5′端带磷酸基团、3′端带羟基的非蛋白编码的调控小RNA家族。 Notes are for internal training use only * 离心后，各个成分被分层分离，由下至上依次是红细胞、中性粒细胞、密度梯度液和单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞、上皮细胞和肿瘤细胞），最上层是血浆。由于肿瘤细胞可能会移入血浆组分，而且如果不能立即离心会影响各类细胞的分层效果。 （ｉｓｏｌａｔｉｏｎｂｙｓｉｚｅｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＩＳＥＴ) ８μｍ孔径的聚碳酸酯膜可使较小的淋巴细胞和中性粒细胞通过，而较大的肿瘤细胞则被阻滞在膜上 Notes are for internal training use only * * -Slide shows phenotype of circulating tumor cells and the Immunomagnetic Labeling and Immunofluorescent Identification of those cells CK+, EpCAM, DAPI, CD45- -Circulating tumor cells has three characteristics The first is EpCAM or Epithelial Cell adhesion molecule -CK(cytokeratin 8,18, and or 19) and an intact nucleus -Circulating tumor cells can be further characterized as seen in this example -System positively discriminates Leukocytes by using CD45 * Introduction to the components. 获取CTC需要解决的技术问题 从红细胞和白细胞中富集恶性肿瘤细胞 将恶性肿瘤细胞与红细胞、白细胞、正常上皮细胞、造血干细胞等区分开来 每10mL血液中可能仅含有几个到几十个循环肿瘤细胞，而10mL血液中含有的白细胞约有1亿个，红细胞有500亿个。 三种技术 过滤法 ISET: Isolation by Size of Epithelial Tumor cells 8μm孔径过滤膜，漏检体积较小的肿瘤细胞 敏感性低 梯度密度法 肿瘤细胞和单核细胞密度小于1.077g/ml CTC纯度低，混入较多白细胞 肿瘤细胞会迁移至血浆层，而聚集后容易下沉 聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)对细胞有毒性 免疫磁珠法 肿瘤细胞表面抗原EpCAM与包绕着磁珠的特异性单抗相结合 CellSearch细胞保存方法长达96小时 实验室室间差异小 EpCAM的假阳性和假阴性 CellSearch 是全球第一也是唯一经FDA批准可用于临床的循环肿瘤细胞（CTC）产品 1983 磁流体 白细胞 Anti-CD45 CD45 Nucleus DAPI 如何鉴别出CTC? 藻红蛋白 (PE) 变藻蓝蛋白 (APC) CTC Anti-EpCAM磁珠 Anti-CK-PE Nucleus DAPI CK EpCAM 在CellSearch?检测中，CTC 被设定为： EpCam CK-8,18 和/或19 DAPI CD4