siRNA用于肿瘤抑制的生物学原理.pptVIP

介绍 siRNA用于肿瘤抑制的生物学原理以及前期重要研究成果 肿瘤（Tumor）是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物。 肿瘤 良性肿瘤 恶性肿瘤 (原发灶) “转移灶 “ 癌症（cancer） 无浸润和转移能力， 对机体危害较小 侵袭和扩散转移 全身扩散，严重 危害机体 How to solve it ？ 常规治疗方法： 根治性手术：晚期肿瘤切除率低，术后易复发、转移、效果不理想 药物治疗：很难只作用于癌基因本身而不影响相对应的未发生突变的原癌基因及其相关因子 化学治疗：将药物经血管带到全身，对身体所有细胞都有影响。毒副作用强 放射治疗：利用高能电磁辐射线作用于生命体，使生物分子结构改变，达到破坏癌细胞目的的一种治疗方法，难于根治 参考文献（1）siRNA特异性沉默hTERT mRNA对人舌癌Tca8113细胞体内外生长的影响（2）siRNA为基础的RNAi在肿瘤基因治疗中的应用进展 （3）靶向survivin基因不同位点的siRNA对PC-3细胞增殖和凋亡的影响 （4）Nanoparticles Modified With Tumor-targeting scFv Deliver siRNA and miRNA for Cancer Therapy 以siRNA为基础的RNAi对恶性肿瘤研究进展开创了肿瘤基因治疗的新天地 Two daily intravenous injections of the combined siRNAs in the GC4-targeted nanoparticles significantly reduced the tumor load in the lung. From：《Nature》 · Molecular Therapy , (22?June?2010) 2006年度诺贝尔生理学或医学奖 安德鲁·法尔 克雷格·梅洛 RNA干扰机制—双链RNA沉默基因 参考文献：（1）RNA干扰在妇科恶性肿瘤的研究进展（2）siRNA表达载体对肝素酶基因的沉默作用 siRNA(short interfering RNA) 即小分子干扰RNA 是由RNase家族中的Dicer核酸内切酶在细胞中剪切自然存在的dsRNA过程中产生的，它是RNA干涉的关键调控因子，其为21～23nt的双链RNA，该双链的3’端有2个突的碱基，此结构对基因沉默效应十分关键，5’端则具有磷酸基。 siRNA具有稳定、持久、安全、特异性，作用强大等特点．通过制备特定的siRNA导人生物体内可以有目的地抑制靶基因的表达． 现已逐渐应用于医疗、预防等领域，尤其是siRNA对恶性肿瘤的作用已成为当今的研究热点。且可以针对多个基因或基因族的共有序列来抑制多个基因的表达!从而能更有效地抑制肿瘤生长。 siRNA干扰STAT3基因对食管癌Eca-109细胞生物学特征研究 选自《中国肿瘤临床》2009年第36 卷24期 siRNA1：CTGCTAAGATTCAGTGAAA； siRNA2：GCGTCCAGTTCACTACTAA； siRNA3：TCAGCACAATCTACGAAGA； Negative（阴性对照）：TTCTCCGAACGTGTCACGT （1）针对人STAT3 基因mRNA 序列设计合成3 对编码小干扰RNA （siRNA）的DNA 模板  （2）将其连入pRNAT-U6.1/neo质粒中，构建STAT3-siRNA表达载体，稳定转染人食管癌Eca-109细胞 （3）利用RT-PCR、Western blot技术分别检测转染细胞中STAT3基因mRNA和蛋白的表达，MTT实验、流式细胞技术检测转染细胞的增殖、细胞周期和凋亡变化情况 siRNA3 实验组STAT3 mRNA 的表达较对照组明显减少，siRNA1 和siRNA2 实验组STAT3 mRNA 的表达与对照组无明显差异。 结论：STAT3-siRNA 抑制STAT3 基因mRNA表达 结论：siRNA3明显抑制了Eca-109 细胞中STAT3 基因mRNA 和蛋白的表