共表达TrxA和DsbC对富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中表达的影响.pdfVIP

维普资讯 ISSN lx【】7—7626 中国生物化学与分 子生物学报 2x【】2年 8月 CN 11-3870／Q ChineseJournalofBiochemistryand MolecularBio1o l8(4)：486～489 ．M-． ， 、 表达 TrxA和 DsbC对富含二硫键 的异源蛋 白 在大肠杆菌 中表达 的影响 刘志冈1， 林建波， 康铁军， 俞炜源 (军事 医学科学 院生物工程研 究所 ，北京 100071) 摘要 以复制子为 pl5A的质粒 pACU184为基础 ，构建 了 3种表达硫氧还 蛋 白(TrxA)或 ／和二硫键 异构酶 (DsbC)的表达质粒 ．经 IPTG诱导 ，克隆 的DsbC和 TrxA都 以可溶 的形式 高表达 ．分别将构建 的 3种表达质粒与复制子为 colEl并克隆有人源化 鼠抗人纤维蛋 白单链抗体一低分子量尿激酶融合 基 因(C6．UK)的表达质粒共转化大肠杆菌 XL1一blue，在 30~C用 IPTG诱 导表达 ．SDS—PAGE显示 ，共表 达 TrxA或 DsbC都能导致 C6一UK融合蛋 白的部分可溶性表达 ，而且 同时共表达 TrxA和 Dsbc2种分 子时 ，C6．UK完全 以可溶形式表达 ，但表达量 降低 ．分别用溶 圈法和 ELISA检测 了各种共表达 时可 溶表达产物 的生物活性 ．结果显示 ，只有共表达 OsbC时才能检测到 明显 的 C6一UK融合蛋 白的双功 能 ． 关键词 硫 氧还蛋 白，二硫 键异构 酶 ，低分子 量尿 激酶 ，共表 达 中图分类号 Q78 The InfluenceofCoexpression ofTrxA and DsbC totheExpreesion ofHeterogenousProtein with M ultipleDisulfideBonds LIUZhi—gang，LIN Jian—bo，KANGTie—jun，YUWei—yuan (InstituteofBiotechnolog?，Academ?D厂Militam MedicalSciences，Beijing 100071，China) Abstract BasedontheplasmidpACU184thatcarriedtheoriginofreplicationfrom plasmidp15A ，threeex— pressionvectorsthatcouldexpressdisulfideisomerase(DsbC)and／orthioredoxin(TrxA)wereconstructed．Af— terinducedwith IPTG ．cloned DsbC andTn(A could beexpressed in solublefoin3with high levelin E ．col ． These threevectorswererespectivelytransformed into E．coliXL1一blue togetherwith acompatible expression vectorforthefused geneofhumanized mouseanti—human fibrin ScFv and lOW molecularweightsingle chain urokinase (C6一UK)．W iththeinducementof1mmol／LI Gat30oC，SDS—PAGEshowedthatC6一UKwasex— pressed in partiallysolubleform