第十六章高效液相色谱法.pptVIP

16-1 高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 16-2 高效液相色谱仪流程及主要部件 2.主要部件 (2)梯度淋洗装置 (3) 进样装置 (4) 高效分离柱 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器（differential refractive index detector） d. 荧光检测器（fluorescence detector） 高效液相色谱的固定相和流动相 （－）固定相 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒。 硬胶主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。固定相按孔隙深度分类，可分为表面多孔型和全多孔型固定相两类。 1.表面多孔型固定相 基体是实心玻璃珠，在玻璃球外面覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、离子交换剂、分子筛、聚酸胺等。 这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。 （二）流动相 流动相对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) （2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。 对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。 16-3 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 16-4 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 16-5 化学键合相色谱bonded-phase chromatography 1．键合固定相类型 用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇基(Si一OH)与有机分可成键,即可得到各种性能的固定相。一般可分三类 （1）疏水基团 如不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等 （2）极性基团 如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。 （3）离子交换基团 如作为阴离子交换基团的胺基，季镀盐； 作为阳离子交换 基团的磺酸等. 16-5 化学键合相色谱bonded-phase chromatography 2.化学键合固定相特点： （1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击； （3）耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱；适用于分离容量因子k值范围宽的样品。 存在着双重分离机制：(键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主； 3．反相健合相色谱法 固定相：极性较小的键合固定相，如硅胶-C18H37、硅胶-苯基等； 流动相：极性较强的溶剂，如甲醇、乙睛-水、水和无机盐的缓冲溶液等。 多用于分离多环芳烃等低极性化合物；具有柱效高，能获得无拖尾色谱峰的优点。 分离机理：疏溶剂作用。把非极性的烷基键合相看作一层键合在硅胶表面上的十八烷基的“分子毛”，这种“分子毛”有较强的疏水特性。当用极性流动相来分离含有极性官能团的有机化合物时，一方面，分子中的非极性部分与固定相表面上的疏水烷基产生缔合作用，使它保留在固定相中；而另一方面，被分离物的极性部分受到极性流动相的作用，促使它离开固定相，并减小其保留作用。显然，两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保留行为。 4.正相键合相色谱法 固定相:极性的有机基团，CN、NH2双羟基等键合在硅胶表面； 流动相:而以非极性或极性小的溶剂（如烃类）中加入适量的极性溶剂（如氯仿、醇、乙腊等）为分离极性化合物。 主要用于分离异构体、极性不同的化合物，特别适用于分离不同类型的化合物。 16-6 离子交换色谱ion-exchange chromatography 3.离子交换色谱分离固定相 16-7