十四章遗传密码和遗传信息的翻译系统说课材料.pptVIP

第十四章 遗传密码和遗传信息的翻译系统;三联密码的证实。;;它们只能在B菌株上生长形成噬菌斑 开始用原黄素诱导的突变称FCO， 他们再用原黄素诱导产生回复突变，在E.coli K（λ）菌株中出现了噬菌斑。 用遗传学的方法和野生型杂交发现它们并不是真正的野生型。 校正突变（A suppressor mutation）抵消或抑制了前一次突变的效应，;校正突变的特点如下：;;;三.利用突变来解读密码;四.无细胞系统的建立;他们的方法是: (1) 去模板：用DNAase处理E.coli抽提物，使DNA降解，除去原有的细菌模板。 (2) 加入pol U：合成了多聚苯丙氨酸， 这一结果不仅证实了无细胞系统的成功，同时还表明UUU是苯丙氨酸的密码子。 分别加入polyA，polyC 和polyG 结果相应地获得了多聚赖氨酸，多聚脯氨酸和多聚甘氨酸。; (3) 按比例加入２种核苷混合的多聚物 由于当时还未分离RNA pol酶，无法按设计的模板来合成RNA，Nirenberg又想出了一种新的方法，就是按一定的碱基比例来合成RNA。 比如在底物中加5份的UDP和1份的GDP， 碱基比为U：G＝5：1， 它们能组成8种三联体： UUU，UUG，UGU，GUU， GGG，GGU，GUG，UGG。 U和G将随机地加入到三联体中，这样按比例各个位于上进入U和G 的概率不同，。如氨基酸测定结果：;如UUU：UGG＝（5?5?5）:（5?1?1） ＝ 25 ： 1 同理UUU：UUG ＝5 ：1， 根据检测结果推测: 苯丙氨酸（UUU）：半胱氨酸（UGU） ＝ 5 ： 1 苯丙氨酸（UUU）：缬氨酸（GUU） ＝ 5 ： 5 苯丙氨酸（UUU）：甘氨酸（GUU） ＝ 24 ： 1 ;五.三联体结合实验;;六. 利用重复共聚物破译密码;;;第二节 遗传密码的证实和特点;;;二．遗传密码在纤毛虫和线粒体中的改变;一. 遗传密码的特点;;摆动假说(wobble hypothesis)是由Crick.F（1966年）提出的。即当tRNA的反密码子与mRNA的密码子配对时前两对严格遵守碱基互补配对法则，但第三对碱基有一定的自由度可以“摆动”。摆动假说也称为三中读二（2 out of 3 reading）。 ;三中读二一般可分为三种情况： (1) 第１,２两个碱基形成６个氢键时，可??中读二。 如ＣＣＸ，ＣＧＸ，ＧＣＸ和ＧＧＸ。 (2) 第1 ,2两个碱基形成4个氢键时,不可三中读二。 如AAX，ＡＵＸ，ＵＡX 和ＵＵＸ。 (3) 第１，２两个碱基形成５个氢键时, 当第二个碱基为嘧啶时，可三中读二； 如ＵＣＸ，ＡＣＸ，ＣＵＸ和ＧＵＸ。 当第二个碱基为嘌呤时则不能三中读二， 如ＣＡＸ， ＧＡＸ，ＵＧＸ和ＡＧX。 ;第三节 tRNA的结构和功能;（3）TψC常由5bp的茎和7Nt和环组成。此臂负责和核糖体上的rRNA 识别结合； (4)反密码子臂(anticodon arm)常由5bp的茎区和7Nt的环区组成，它负责对密码子的识别与配对。 (5)D环 (D arm)的茎区长度常为4bp，也称双氢尿嘧啶环。负责和氨基酰tRNA聚合酶结合; (6)额外环(extra arm)可变性大，从4 Nt到21 Nt不等，其功能是在tRNA的L型三维结构中负责连接两个区域（D环－反密码子环和TψC-受体臂）。 ;;; （二） tRNA的三维结构; 酵母苯丙氨酸tRNA的三级氢键;tRNA 的碱基 堆积;L型结构;二.校正tRNA;;; （二）错义抑制;抑制突变的特点:;4.赭石突变抑制基因不仅可以识别赭石密码子（UUA），也可以抑制琥珀突（Am）码子UAG。但反过来Am抑制基因（CUA）就不能抑制赭石突变（UAA），这是由于摆动缘故所造成。 5. 当细胞中含有多个tRNA拷贝时，抑制才能发挥作用。 6. 有的抑制基因，不仅可以识别终止密码子，而且还可以识别原来的密码子。如野生型tRNATrp的反密码子是CCA，它可以识别原来的密码子UGG，而且还可以识别终止密码子UGA。;7.校正基因一般不会影响正常的终止 (1)校正基因识别的终止密码子不一定和正常终止的密码子相同。有时正常终止位点有两个连