东北林蛙体胶原蛋白酶法制备工艺.pdf

·７８· 上海中医药杂志 ２０１５年第４９卷第１２期 ＳＨ．Ｊ．ＴＣＭＤｅｃ．，２０１５；Ｖｏｌ．４９Ｎｏ．１２ ＤＯＩ：１０．１６３０５／ｊ．１００７１３３４．２０１５．１２．０２５ 东北林蛙体胶原蛋白酶法制备工艺 李慧萍，李　梁，范　宁，刘少华，卫功庆 吉林农业大学中药材学院（吉林　长春　１３０１１８） 【摘要】　目的　探索胃蛋白酶法制备东北林蛙体胶原蛋白的最佳工艺条件，并对提取得到的胶原蛋白的纯度及其氨基酸含量进行 测定。方法　采用单因素及正交试验，以提取率为指标，优化胃蛋白酶提取东北林蛙蛙体胶原蛋白的工艺条件。通过紫外光谱（ＵＶ） 分析确定东北林蛙体胃蛋白酶溶性胶原蛋白（ＰＳＣ）的类型，反相高效液相色谱法（ＲＰＨＰＬＣ）测定ＰＳＣ中氨基酸的含量。结果　ＰＳＣ 最佳提取工艺为温度３７℃，Ｅ／Ｓ２０％，料液比１∶２０，时间１２ｈ；在此条件下，胶原蛋白提取率达到８８．６％。经紫外光谱（ＵＶ）分析，ＰＳＣ 在２３４ｎｍ处有最强吸收峰，反相高效液相色谱法（ＲＰＨＰＬＣ）测定发现，ＰＳＣ氨基酸含量丰富，包含人体所需的８种必需氨基酸，其中 甘氨酸（Ｇｌｙ）、脯氨酸（Ｐｒｏ）、亮氨酸（Ｌｅｕ）和丙氨酸（Ａｌａ）等氨基酸含量较高，符合 型胶原蛋白特征。结论　优化后的制备方法提 Ⅰ 取率高、重复性好，可为ＰＳＣ的工业化生产提供参考。 【关键词】　东北林蛙体；胃蛋白酶；胶原蛋白；制备工艺；必需氨基酸 ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｃｏｌｌａｇｅｎｆｒｏｍＲａｎａｄｙｂｏｗｓｋｉｉｕｓｉｎｇｐｅｐｓｉｎ ＬＩＨｕｉｐｉｎｇ，ＬＩＬｉａｎｇ，ＦＡＮＮｉｎｇ，ＬＩＵＳｈａｏｈｕａ，ＷＥＩＧｏｎｇｑｉｎｇ ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＭａｔｅｒｉａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｐｒｅｐａｒｉｎｇｃｏｌｌａｇｅｎｆｒｏｍｂｒｏｗｎｆｒｏｇ（ＲａｎａＤｙｂｏｗｓｋｉｉ）ｂｏｄｙｂｙｐｅｐｓｉｎ，ａｎｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅｐｕｒｉｔｙｏｆｃｏｌｌａｇｅｎａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｂｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅ，ｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｔｒｉａｌｓａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｐｒｅｐａｒｉｎｇｃｏｌｌａｇｅｎｆｒｏｍｔｈｅｂｏｄｙｏｆｔｈｉｓｂｒｏｗｎｆｒｏｇｗｉｔｈｐｅｐｓｉｎ．Ｔｈｅｔｙｐｅｏｆｐｅｐｓｉｎｓｏｌｕｂｉｌｉｚｅｄｃｏｌｌａｇｅｎ（ＰＳＣ）ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔａｎｄｖｉｓｉｂｌｅｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（ＵＶ），ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎＰＳＣｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｕｓｉｎｇｒｅｖｅｒｓｅｄｐｈａｓｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＲＰＨＰＬＣ）；Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆＰＳＣｗｅｒｅｔｈａｔ３７℃ｆｏｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，２０％ｆｏｒＥ／Ｓ，１∶２０ｆｏｒｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｍａｔｅｒｉａｌ ｔｏｓｏｌｖｅｎｔａｎｄ１２ｈｆｏｒｔｉｍｅ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｓｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＰＳＣｗａｓｕｐｔｏ８８．６％．ＴｈｅＰＳＣｈａｄｔｈｅｓｔｒｏｎｇｅｓｔａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋａｔ２３４ｎｍｔｈｒｏｕｇｈＵＶ ａｎａｌｙｓｉｓ．ＲｅｓｕｌｔｓｏｆＲＰＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＰＳＣｃｏｎｔａｉｎｅｄａｂｕｎｄａｎｔｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ８ｅｓｓｅｎｔｉａｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓｎｅｅｄｅｄｂｙｈｕｍａｎｂｏｄｙ，ｉｎｗｈｉｃｈ Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，ＬｅｕａｎｄＡｌａｈａｄｈｉｇｈｅｒｃｏｎｔｅｎｔｓｔｈａｎｔｈｅｏｔｈｅｒｓ，ｗｈｉｃｈｍａｔｃｈｅｄｗｉｔｈｔｈｅｆｅａｔｕｒｅｓｏｆｃｏｌｌａｇｅｎ ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｈａｄ