裙带菜配子体 基因工程 启动子 荧光蛋白 鲎素多肽 瑞替普酶论文.docVIP

裙带菜配子体论文：裙带菜配子体转基因研究 【中文摘要】本文以裙带菜配子体为材料,从转化方法、筛选标记的选择、功能基因稳定转化和内源启动子克隆四个方面对裙带菜的基因工程进行了深入研究。建立了稳定的遗传转化体系,进一步充实了大型海藻转基因的研究,为裙带菜的育种工作提供了新的手段,使得利用裙带菜生产外源活性物质成为可能。本文具体的研究结果为:1.利用基因枪法将荧光标记基因(EGFP)载体导入裙带菜配子体中,通过共聚焦荧光显微镜观察,找到了表达绿色荧光蛋白的配子体,实现了EGFP基因在裙带菜配子体中的瞬间表达,确定了基因枪法的转化条件,验证了所用表达质粒载体在裙带菜配子体转基因研究中的有效性。2.利用基因枪法将鲎素多肽基因(tac)和草丁膦抗性基因(bar)导入配子体,通过草丁膦筛选和配子体恢复生长,挑选到抗性克隆,PCR检测显示有60%的抗性克隆含有bar基因,由此证明bar基因是裙带菜配子体基因工程有效的筛选标记。此外,利用PCR方法从转化组中扩增出tac基因,成功构建了转化鲎素多肽(tac)基因的配子体。3.在鲎素多肽基因成功转化的基础上,利用基因枪法将溶栓药物瑞替普酶基因(rt-pa)和草丁膦抗性基因(bar)导入裙带菜配子体中,筛选后获... 【英文摘要】Using Undaria pinnatifida gametophytes, the transformation method, selectable marker, functional genes stable transformation and promoter cloning were investigated and a stable transformation system was constructed in this paper. Based on the research, a new method for U. pinnatifida breeding was provided and make it possible to produce outer bioactive material with U. pinnatifida in the future. The specific results are as follows:1. Enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene has been transformed in... 【关键词】裙带菜配子体 基因工程 启动子 荧光蛋白 鲎素多肽 瑞替普酶 【英文关键词】Undaria pinnatifida gametophytes genetic engineering promoter EGFP tachyplesin gene peptide(tac) reteplase (rt-pa) 【目录】裙带菜配子体转基因研究 摘要 5-6 Abstract 6 第一章 前言 10-19 第一节 裙带菜生物学特性 10-11 1 裙带菜生活史 10 2 裙带菜配子体无性繁殖系 10-11 第二节 海藻基因工程 11-15 1 微藻基因工程 11-13 2 大型海藻基因工程 13-15 第三节 藻类基因组测序 15-18 1 藻类基因组测序概况 15-17 2 褐藻基因组测序进展 17-18 本论文研究目的及意义 18-19 第二章 绿色荧光蛋白基因(EGFP)在裙带菜配子体中的表达 19-34 第一节 绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达载体的构建 19-29 1 材料与方法 19-27 2 结果 27-28 3 讨论 28 4 小结 28-29 第二节 绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达载体的转化和检测 29-34 1 材料与方法 29-32 2 结果 32-33 3 讨论 33 4 小结 33-34 第三章 功能基因在裙带菜配子体中的转化 34-50 第一节 瑞替普酶（rt-pa）基因和鲎素（tac）基因转化裙带菜配子体 34-40 1 材料与方法 34-37 2 结果 37-40 3 讨论 40 4 小结 40 第二节 转基因裙带菜配子体的鉴定 40-50 1 材料与方法 40-45 2 结果 45-48 3 讨论 48-49 4 小结 49-50 第四章 叶绿素a/c 结合蛋白基因（lhcf）启动子的克隆 50-64 第一节 裙带菜配子体lhcf 基因序列的克隆 51-54 1 材料与方法 51-52 2 结果 52-54 3 讨论 54 4 小结 54 第二节 lhcf 基因上游5’调控序列的扩增和分析 54-64 1 材料与方法 54-58 2 结果分析 58-62 3 讨论 62-63 4 小结 63-64 附录 64-81 参考文献 81-8