细胞能量代谢分析法评价对乙酰氨基酚对人肝细胞.pdf

中国药物警戒第16卷第4期 2019年4月 April,2019,Vol.16,No.4 细胞能量代谢分析法评价对乙酰氨基酚对人肝细胞线粒体有氧呼吸 的毒性作用 * 李梅 刘宁 张凡 孙华 （中国医学科学院北京协和医学院药物研究所，北京 100050） e 利用SeahorseXF24海马细胞能量代谢分析系统分析对乙酰氨基酚（APAP）对人肝细胞线粒体有氧呼 吸的整体影响，为APAP在能量代谢角度的毒性防控及毒性机制研究提供方法学的参考。 体外培养人肝细胞系 （HepG2），分别以1、2、4、8、16mMAPAP处理细胞24h，MTT法检测细胞增殖情况，倒置显微镜观察细胞形态；BCA e 法定蛋白含量。采用SeahorseXF24海马细胞能量代谢分析系统建立HepG2细胞实验方法，并检测不同浓度APAP e 对人肝细胞线粒体有氧呼吸的影响和特点。 SeahorseXF24海马细胞能量代谢分析系统检测HepG2细胞能量 4 代谢的最佳条件为：24孔板细胞密度2×10/孔，FCCP浓度为2μM。MTT结果中对人肝细胞增殖有显著抑制作用 的APAP（4、8、16mM）能干扰人肝细胞的线粒体有氧呼吸，其中4、8mMAPAP有降低肝细胞基础呼吸和ATP生成 的趋势，16mMAPAP能显著抑制肝细胞的基础呼吸、最大呼吸和ATP合成。 高剂量APAP（16mM）在人肝细 胞活细胞体系中能够显著抑制细胞能量代谢，对活细胞线粒体有氧呼吸显示显著毒性作用。 e 对乙酰氨基酚；SeahorseXF24；线粒体有氧呼吸；肝毒性 *