用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用.docVIP

PAGE PAGE 174 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：/ 用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用 Measure the Ability of Eliminating the Free Radical by the Prescription Granule of Chinese Traditional Medicine Using the Fluorometry 张承 蔡继文?* （中山大学化学与化学工程学院有机化学研究所。广州510275） 摘要 Fe2+－EDTA在弱碱性介质中可以还原溶解氧，最终生成羟自由基。本实验用荧光分光光度法测定了山茱萸等9种市售的中药配方颗粒对Fe2+－EDTA体系产生的羟基自由基(·OH)的抑制程度，测定了不同浓度的半支莲等三种中药的清除率，并得到了其清除率与其浓度得线性耦合曲线，比较了山茱萸和半支莲对自由基的清除的能力。 关键词 中药；羟基自由基；荧光分光光度 Abstract: Fe2+-EDTA system in basic condition can reduce O2 that resolved in water to ·OH. We use the Fluorometry to evaluate the extent that the prescription granule of Chinese traditional medicine such as Fructus Corni eliminate the ·OH. We measure the eliminating rate of different concentration., and obtain the linear fit curve to the concentration.We also compare the eliminating ability between Fructus Corni and Herba Scutellariae Barbatae. Key words: Chinese traditional medicine, hydroxy free radical, Fluorometry 1 前言 自由基是在分子氧、多不饱和链脂肪酸巯基化合物、醌类化合物等的反应和代谢过程中产生或衍生出来的, 是一种外层轨道上含有未配对电子的原子、原子团或呈特殊状态的分子。机体内FR大量产生或清除过缓,使积累超过临界水平后,会对机体产生损伤[1]。·OH是目前已知的化学性质最活泼的一种活性氧分子, 其氧化能力强、寿命短、对机体危害大[2]。 自Harman创立衰老的自由基学说[3]以来的半个世纪,人们对自由基的产生及其对人体所产生的危害有了越来越深刻的认识, 各种炎症、癌症、脏器损伤、老化等都与自由基密切相关, 因而研究抗自由基药物以保护机体, 已是当前抗衰老研究工作中所瞩目的问题之一[4]。 中药抗氧化剂具有经济和毒、副作用小等明显的优点, 在中草药中, 有许多药物都对自由基有清除作用[4]。 中药配方颗粒品质优良，效果客观，使用简便快捷，必将成为21世纪中医药配方的主流[5]。因此研究它的药性有着重要的意义。当前对中药的提取物的清除自由基研究已经比较多。而对使用的越来越广泛的中药配方颗粒清除自由基的研究报道较少。本实验采用了市售的中药颗粒配方进行研究。 测定清除自由基的方法[6]有电子自旋共振法[7]，化学发光法[8]，紫外分光光度法[9]，荧光分光光度法等[10]。本实验采用荧光分光光度法进行测定，其仪器简单、操作方便，广泛用于检测中药消除自由基性能的实验中。 2 实验部分[10] 2.1实验原理 Fe2+－EDTA 在弱碱性介质中还原溶解氧生成超氧阴离子自由基(O2-·) ,O2-·进一步歧化为H2O2和氧分子,之后Fe2+－EDTA 与H2O2反应生成羟基自由基(·OH).·OH进攻对苯二甲酸产生唯一的强荧光羟基化产物2－羟基对苯二甲酸(HOTP)。·OH清除剂加入体系后，与对苯二甲酸竞争结合·OH ,导致对苯二甲酸的羟基化产物HOTP 的生成量减少，从而使体系荧光强度明显降低。 2.2 仪器与试剂 日本 岛津RF-5301PC荧光分光光度计，激发波长316 nm 对苯二甲酸钠溶液(1.0×10-4 mol/ L); Fe2+( 硫酸亚铁溶液,1.0×10- 3 mol/ L)； EDTA(1.0×10- 3 mol/ L)；磷酸钠缓冲溶液(0.2 mol/ L ;pH =7.4)。 中药配方颗粒购于中山附属第一医院大药房和广州医学院附属第二医院。 2.3 实验方法 在10 mL刻度试管中依次加入1.0×10- 4 mol/ L 对苯二甲酸液0.50 m