培养基与制备.ppt

微生物体内硝酸盐不能直接被利用，必需先转化成还原态氮。 微生物能够利用的是高度还原态的氮，即可以利用氨，其化合价是－3。而硝酸盐处于高度氧化状态，其中氮原子的化合价是＋5。当以硝酸盐为氮源时，它必须先还原成氨后才能用于生物合成。 和碳源利用相同，微生物先利用容易利用的氮源再利用缓慢利用的氮源。 氮源的代谢规律是：随着菌体生长，氮源被利用，氨基氮和氨氮都下降，到中期下降缓慢，并有一段时间维持在一定水平，到发酵后期，由于菌体衰老自溶，放出氨基氮，使氨基氮上升。 3、磷代谢 磷含量随着发酵的进行不断减少。 磷对菌体合成有促进作用：促进糖代谢，在有氧情况下，糖代谢走HMP途径，葡萄糖→葡萄糖6－磷酸→葡萄糖酸6－磷酸→戊糖磷酸——合成核酸 磷浓度对链霉素产生菌葡萄糖利用的影响 加磷量（M）以K3PO4计 利用葡萄糖的量(mg/ml) （pH=7.3） 0 0.62 0.001 0.92 0.002 1.24 0.01 1.64 磷对产物合成有抑制作用： 磷多会抑制磷酸酯酶，使一些非活性的抗生素磷酸盐不能脱去磷酸而成为有活性的终产物。 磷多使糖代谢走三羧酸循环，使某些产物合成所需的前体量减少。如四环素合成需要丙二酰CoA、乙酰CoA，磷多了使这些前体进入三羧酸循环，减少了前体。因此代谢中只有当磷减少到一定水平才开始合成抗生素。 发酵的中后期营养物消耗造成微生物所需营养缺乏，我们应采取什么措施？ 增加基础料的营养成分含量 一定阶段补入必要的营养成分 二 发酵控制与中间补料 中后期营养不足，菌体过早衰老 初始培养基营养过于丰富造成菌浓过大 初始培养基中葡萄糖过多引起抑制 代谢后碳氮源不平衡、微量元素缺乏 合成的产物或中间体积累的毒性 方法：采取较低浓度的基础培养基，待菌体生长到一定阶段，补入适当营养物，延长发酵的产物合成期。 意义：控制菌的生长速率，并控制产生菌培养中期的代谢活动，延长合成期，推迟菌体自溶，加入前体增加合成产物的中间体，从而使产量大幅度提高。 （一） 中间补料的意义及原则 中间补料就是在发酵过程中，补充某些营养物料，满足产生菌的代谢活动和产物合成的需要。 补料原则：控制和引导产生菌在培养过程中，特别是中期的生化代谢活动向着有利于产物合成和分泌的方向发展。 补料内容：碳源、氮源、前体、无机盐或水 （二） 补料控制 1、补充微生物所需的能源和碳源 碳源是微生物长菌体时需要量最大的物质，在发酵前期消耗很快，到了产物合成阶段菌体要维持活性必须补充碳源，以便延长产物合成期。 例 谷氨酸：在原工艺的基础上，减少初糖浓度，增加生物素用量达5μg/l，加大接种量到10%左右，以利于菌体迅速繁殖，获得生产需要的足够量的菌体。 当进入产酸期，糖耗达2%左右，连续补糖，维持2%左右的糖浓度，提高温度36~370C，流加氨水或尿素，维持pH7.0~7.5，利用菌体所形成的酶系继续进行发酵，产酸可达10%。 后来补糖方法在抗生素发酵中普遍采用。 补糖控制考虑：补糖时间、补糖量、补糖方式 参考数据：糖耗速率、残糖浓度、pH变化、菌体浓度、菌丝形态、发酵液粘度、溶氧浓度等指标 根据还原糖水平，如赤霉素还原糖降到0.6％就需要补糖， 根据总糖水平，根据菌的酶系和pH变化的大小决定。 注意：不同的发酵阶段控制的残糖浓度不同 补糖时间控制很重要，过早会刺激菌体生长，加速糖的消耗；补糖过迟会使菌体所需要的能量供应跟不上，干扰菌的代谢。 例：四环素 补糖时间 96h效价 20h 6000u/ml 45h 10000u/ml 62h 6000u/ml 补糖时间 说明 开始补糖的时间必须根据代谢的变化情况来决定，根据基础培养基的碳源种类及用量、菌丝生长情况、糖的消耗速率及残留水平来综合考虑，不能单纯以时间为依据。 补糖量的控制，以控制菌体浓度不增或略增为原则，使产生菌的代谢活动有利于产物合成。一般在补糖开始阶段控制还原糖在较高水平，以利于产物合成，但高浓度的