动物细胞和植物细胞培养反响器.pptVIP

使用过的旧瓶子培养BHK21 细胞时细胞更容易发生脱落，而使用新瓶子进行培养时细胞能良好生长。 最初采用滚瓶培养。 Van Wezel 在1967年开发了一种微载体系统培养壁依赖性细胞。 微载体是直径为60－250um的微珠。 细胞贴附于微载体上，悬浮于培养基中，逐渐生长成单层，具有单层培养和悬浮培养的优点。 玻璃微珠 制备微载体的材料主要有： – 葡聚糖（DEAE-Sephadex A50及A25） – 塑料 – 明胶 – 玻璃 – 纤维素 2、悬浮培养：少数悬浮生长型动物细胞在离体培养时不需要 附着物，悬浮于培养液中即可良好生长。适用于一些来源 于血液、淋巴组织的细胞，许多肿瘤细胞以及某些转化细 胞等非贴壁依赖性细胞 。 动物细胞的悬浮培养是在微生物发酵的基础上建立起 来的，但由于动物细胞没有细胞壁，不能耐受剧烈搅拌和 通气时产生的剪切力，因而又与经典的发酵不同。 小规模悬浮培养 悬浮培养瓶 3、固定化培养：是指采用吸附（固体吸附剂）、共价贴附（与固相载体结合）、共价交连（用试剂处理使细胞间形成桥而絮结）、包埋（将细胞包埋在多孔材料内）等方法将细胞固定在支持物上，或将细胞嵌入微囊或高分子聚合物的网络中进行培养。该方法对贴壁依赖性细胞与非贴壁依赖性细胞均适用。 二、细胞培养的操作方式 1、分批式操作 2、流加式操作 3、半连续式操作 4、连续操作 5、灌注培养 灌注培养 1．通气搅拌式细胞培养反应器 通气搅拌式动物细胞培养反应器顾名思义就是既有机械搅拌又有通气装置，是在微生物发酵反应器基础上改进的一类细胞培养反应器，适用于悬浮细胞的培养或者生长在微载球的贴壁细胞培养。机械搅拌和通气形式的不同产生了各种各样的通气搅拌反应器。其中比较典型的是笼式通气搅拌反应器。 三、动物细胞大规模培养反应器 1.1 笼式通气搅拌器 气泡用丝网隔开，避免在向培养基通气时损伤细胞。同时在采用微载体系统培养时，微载体不会被由于通气所产生的泡沫滞留在气液界面中。 笼式搅拌器剖面图 优点：避免向培养基直接通气时气泡损伤细胞，剪切力小。没有移动部件，密封好。 缺点：氧传递系数小，不能满足高密度细胞的耗氧要求；气路系统不能就地灭菌。 反应器适用范围 悬浮培养：非贴壁依赖性细胞和贴壁于微载体的贴壁细胞。 2．气升动物细胞培养反应器 与微生物发酵及植物细胞培养的反应器结构相同。 优点： 结构简单，避免使用轴承而造成细胞培养的污染； 传质性能好，尤其是氧的传递效率高； 产生的湍动温和，剪切力小，循环量大，使细胞营养成分均布于培养基中。 气升式反应器结构示意图 1—培养液上升区 2—培养液下降区 3—气液分配板 4—液体上升口 5—气体导入口 6—液体引入口 7—气液分离区 8—导流筒 9—液体导入区 /sbs.asp?id=121 3．中空纤维细胞培养反应器 培养筒纤维管内为“内室”，灌流无血清培养液供细胞生长，管间隙为“外室”，接种细胞就贴附于“外室”的管壁上，并吸取从“内室”渗透来的营养，迅速生长繁殖。 由于细胞分泌物的分子量大而无法透过半透膜到“内室”，只能留在“外室”不断被浓缩，当收集产物时，只要把管间“外室”的总出口打开就可获取产物。而代谢物由于分子量小，可以从管壁渗透到“内室”，最后从“内室”总出口排出，不会对“外室”的细胞产生毒害作用。 一种中空纤维细胞培养反应器结构示意图 1—中空纤维束； 2（2‘）—反应器外壳； 3（3‘）—中空纤维束固定板； 4（4’）—中空纤维内腔进出口； 5（5‘）—中空纤维外表面进出口； 6（6）—密封板 用途： 即可培养悬浮生长细胞，又可培养贴壁依赖性细胞。 4．微囊培养系统 美国Damon Biotech 公司创建。 微囊技术：把生物活性物质、完整的活细胞或组织包在薄的半透膜中。 微囊的制备： 在无菌条件下，将活性细胞或生物活性成分悬浮在1.4%海藻酸钠溶液中； 通过特制的成滴器将含有细胞的悬液形成一定大小的小滴，滴入CaCl2中，形成内含活性细胞或生物活性成分的凝胶小珠； 再用半透膜材料包被，形成坚韧多孔可通透的外膜; 重新液化胶化物使其流出，活性细胞或生物活性成分则留在多孔膜内，放入气升式发酵罐内培养。 /sbs.asp?id=122 5．大载体系统 大载体是由海藻酸钠构成。海藻酸钠含有重复排列的葡糖醛酸和甘露糖醛酸，在钙溶液中形成适宜于附着的网络状凝胶珠。在收集细胞时，可用EDT