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胶体在蛋白质分离方面的应用综述 Summarize of the application of colloid Chemistry in proteinseparate 【摘要】 蛋口质是生物大分子，蛋口质溶液是稳定的胶休溶液，具有胶体溶液的特征，其中 电泳现彖和不能透过半透膜对蛋白质的分离纯化都是非常有用的。本文对应用蛋白质的 胶体特性分离纯化蛋口质研究做综述性报告。 【关键词】蛋白质分离电泳胶体综述 【基本原理】 蛋白质之所以能以稳定的胶体存在主要是由于： （1） 蛋口质分子大小已达到胶体质点范围（颗粒直径在1?lOOnm之间），具有较 大表而积。 （2） 蛋口质分了表面有许多极性基团，这些基团与水有高度亲和性，很容易吸附 水分子。实验证明，每lg蛋白质犬约可结合0.3?0.5g的水，从而使蛋白质颗粒外面形 成一层水膜。由于这层水膜的存在，使得蛋白质颗粒彼此不能靠近，增加了蛋白质溶液 的稳定性，阻碍了蛋口质胶体从溶液中聚集、沉淀出来。 （3） 蛋白质分子在非等电状态时带冇同性电荷，即在酸性溶液屮带冇正电荷，在 碱性溶液中带有负电荷。由于同性电荷互相排斥，所以使蛋白质颗粒互相排斥，不会聚 集沉淀。 蛋白质的胶体性质具有重要的生理意义。在生物体屮，蛋白质与大量水结合形成各 种流动性不同的胶体系统，如细胞的原生质就是一个复杂的胶体系统。牛命活动的许多 代谢反应即在此系统中进行。 如杲这些稳定因素被破坏，蛋白质的胶体性质就会被破坏，从而产生沉淀作用。所 谓蛋白质的沉淀作用是指在蛋白质溶液中加入适当试剂，破坏了蛋白质的水化膜或中和 了其分子表面的电荷，从而使蛋白质胶体溶液变得不稳定而发生沉淀的现象。下列方法 可使蛋口质产生沉淀并可有效地用于蛋口质的分离。 一、 电泳方法 原理及优点：在电场作用下，带电颗粒在溶液中的运动称为电泳，在小离了的情况 下，称为离子导屯性现象。这是一种不完全的电解现象，所需的产物不是直接释放在电 极上，而是使它们不同的运动同步受阻在两电极间的屮间位置上。它能分离非常类似的 物质，包括不同的蛋口质，提高了分折和制备的效果，特别是在纸上和在聚丙烯酰胺或 琼脂糖凝胶上区带电泳的采用。 电泳是分离生化物质的一种有效的和多功能的方法。在电场的作用下，电泳流动性 的差别，可用于许多物质的分离，其中包括离子、胶体、细胞物质、细胞器以及全细胞。 以前电泳仅用于常规的生化分析，但近期在制备电泳上取得了许多重大的进展(如低容 积高价值的化合物或试剂的生产中)。 电泳分离的优点是分辨率高和能保持产物的生物活性。 主耍分为：1、毛细管电泳(CE):毛细管电泳是一类以毛细管为分离通道，以高压 直流屯场为驱动力的新型液相分离技术。毛细管电泳具冇多种分离模式：毛细管区带电 泳(CZE)、毛细管等速电泳(CITP)、毛细管等电聚焦(CIEF)等。应用毛细管电泳分离多肽 类物质具有柱效高、分析时间短、所用样品量和试剂少等优点。2、二维凝胶电泳技术 (two—dimensional del electrophoresis, 2-DE) 2-DE 是 1975 年由 O Farrell 首次建立的， 其基本原理是根据蛋口质具有不同等电点和相对分了质量的二个一级特性，将蛋口质的 混合物在等屯聚焦屯泳(isoelectric focusing, IEF)中进行第一维的分离，然后转入十二烷 基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)进行第二维分离，分离胶经显色后，通过商 业化的计算机软件对凝胶图像进行分析处理。3、二维差异凝胶电泳(two2-dimensional difference gel electrophoresis, 2D-DIGE)二维电泳技术的另一个突破.该技术应用两种不 同的荧光染料Cy3和Cy5,分别标记不同的蛋白质样品，然后将两种样品等量混合，在 同一 2-DE中分离?通过在同一块胶上对比一个蛋白点处两种不同荧光的强度，比较两种 状态下特定蛋白质丰度变化、蛋白质的缺失或是否有新蛋白质的出现等。 二、 双水相萃取方法 双水相体系萃取具有如下特点： 含水量高(70%~90%),是在接近生理环境的温度和体系中进行萃取，不会引起生 物活性物质失活或变性； 分相吋间短，自然分相吋间一般为5?15min； 界面张力小(10?7?10?4mN/m),有助于强化相际间的质量传递； 不存在冇机溶剂残留问题； 大量杂质能与所有固体物质一同除去，使分离过程更经济； 易于工程放大和连续操作。由于双水相萃取具有上述优点， 因此，被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。 三、膜分离技术 兴起于20世纪60年代的膜分离技术克服了蛋口质分离过程中的缺陷。它有以下 特点：(1)可以在分子级对蛋白质进行分离而不影响其性质和结构；(2)不需要加