人皮肤角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养和鉴定的实验研究.docVIP

人皮肤角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养和鉴定的实验研究 .I潍坊医学瞳堂生笙鲞塑鱼塑401 论着 人皮肤角质形成细胞 和成纤维细胞的原代培养和鉴定的实验研究 孙文娟,蔡霞,唐胜建,刘亚红,周晓燕,马桂莲,张鹏 (潍坊医学院整形外科研究所,山东潍坊261042;潍坊市人民医院;青岛市胶州中心医院) 【摘要】目的建立人皮肤角质形成细胞(kemtin0cyte)和成纤维细胞(fibroblast)原代培养和体外连续培养 的模型,为组织工程化皮肤提供充足的种子细胞.方法以5一l5岁小儿包皮为材料,胰蛋白酶消化后,分离两 种细胞,分别用无血清表皮培养液(K—SFM),DMEM(10%血清)培养,对年轻细胞(2—4代角质形成细胞,l0—40 代成纤维细胞)均用倒置显微镜进行大体观察,透射电镜进行超微结构观察,并拍照记录,同时进行免疫细胞化学 鉴定.结果消化后得到大量细胞,在培养2周后开始传代,光镜下角质形成细胞皇典型铺路石状,透射电镜下 呈多边形,符合角质形成细胞特征;成纤维细胞光镜下呈梭形,放射状或漩涡状排列,电镜证实是成纤维细胞.免 疫细胞化学检测:角质形成细胞鼠抗人角蛋白(AE/AB)单克隆抗体(mous~anti-cytokeratin)染色阳性;成纤维细胞 鼠抗人I型,Ⅲ型胶原单克隆抗体(anti.TypeI,ⅢCollagen)和鼠抗人波形蛋白单克隆抗体(mouseanti—vim— entin)染色阳性.结论用简便易行,经济实用的方法在体外对角质形成细胞和成纤维细胞进行分离,培养和传 代,能同时得到足够数量的组织工程皮肤的种子细胞. 【关键词】角质形成细胞;成纤维细胞;细胞原代培养;组织工程皮肤 【中图分类号]R318[文献标识码]A[文章编号】l0o4.3101(2oo41o6—0401—03 ExperimentalStudiesonPrimaryC~fivafionandIdentificationofHumanKeratinocytesandFibroblasts SUNWen—juan,CAIXia,TANGSheng—jian,L1UYa0n,ZHOUXiao—yah,MAGui—lian3,ZHANGPeng (PlasticandReconstructiveResearchInstituteoj’WeifimgMedicalCollege,Weifang261042,China; We~hngPeople’sHospital;Jicu)zhouCentralHospitalo/Qingdao) 【ABSTRACT]ObjectiveToestablishamethodofculturinghumankeratinocytesandfibroblastsSOastoDrovidesuf. fieientseedingcellsforskintissueengineering.MethodsKeratinocytesandfibroblastsweredissociatedandharvestedbv trypsinwhichisolatedfromthenorlTlalprepucebycircumcision(5～15yearsold).Theperformanceofcells’growthwereob. servedwithlightmicroscopeandtransmissionelectronmicroscope.Thecells’certainantigensweredetectedwithimmunohist0. chemicalmethod.ResultsHistologically,thekeratinocytesshowedpositivestainingincytokeratinantibody.Theantigensof collagenoftypeI,typeI]]andvimentinweredetectedpositiveinfibroblasts.ConclusionSimplyandsuitably,thismethod callsupplytissueengineeringskinwithenoughseedingcells. 【KEYWORDS]Keratinocytes;Fibroblasts;Cellculture;Tissueengineeringskin 组织工程是目前生命科学领域的研究热点,人工皮肤也是迄今为止最成功的组织工程产品.种子细胞 [作者简介]孙文娟(1978年1j一),女(汉族),III东省胶州市人,在读硕}:.主要研究方向:组织工程化皮肤 402 的培养足组织工程的基本要素,理想的种子细胞应容 易获得,数量足够,同时保持增殖,合成基质等生物功 能