氮_磷_硫对盐生杜氏藻色素积累的影响.docVIP

收稿日期:2004211222 基金项目:四川省科技厅应用基础项目(04J Y 029208022 3通讯作者 文章编号:　049026756(2005022******* 氮、磷、硫对盐生杜氏藻色素积累的影响 孙辉,徐文华,雷高鹏,邓婷婷,杨旺贵,刘玉坤,曹毅,白林含3 (四川大学生命科学学院,成都610064 摘要:研究了盐生杜氏藻(Dunaliella sali na 在不同浓度氮、磷、硫等营养条件下对细胞积累β 2胡萝卜素和叶绿素的影响.发现盐生杜氏藻细胞经过10d 生长,在营养缺乏条件下其β2胡萝 卜素和叶绿素的比率达到最大,积累β2胡萝卜素的最适条件是无氮、无磷和无硫,但是不利于 盐生杜氏藻的生长.讨论了此结果的机理和意义,为利用盐生杜氏藻大规模生产β2胡萝卜素 提供了理论依据. 关键词:盐生杜氏藻;氮、磷、硫;色素积累;β2胡萝卜素 中图分类号:Q945　　　文献标识码:A 盐生杜氏藻(Dunaliella sali na 是真核生物中抗盐性最强的一种藻类.营养缺乏条件下能大量积累β2胡萝卜素,其β2胡萝卜素含量可高达干重的10%左右,最高时可达14%[1],为自然界中所有生物之首,而植物叶子和其它藻类中β2胡萝卜素含量仅为0.3%左右[2].β2胡萝卜素积累于叶绿体内的中性脂质小体中,分布在内囊体片层之间.这也是盐生杜氏藻区别于其他藻类的典型生理特征.β2胡萝卜素是一种广泛存在于光合生物中的脂溶性捕光色素,天然β2胡萝卜素分子呈顺式与反式混合构型,摄入人体后,一部分裂解为维生素A 分子,另一部分具有淬灭体内自由基,防止衰老以及癌变的生物学活性,具有广阔的应用前景.本文重点研究了氮、磷、硫营养元素对盐生杜氏藻积累β2胡萝卜素和叶绿素及其二者比率的影响,为研究盐生杜氏藻的β2胡萝卜素积累机理做出了初步的探讨,以及为工业上建立高产盐生杜氏藻β2胡萝卜素的生产条件提供了理论依据. 1　材料和方法 1.1　材料 盐生杜氏藻(Dunaliella sali na 为本实验室保存藻种. 1.2　方法 1.2.1　培养基和培养条件　采用三角瓶培养,按10%接种量接种,在光照与黑暗周期为16h/8h ,温度(28±1℃环境中培养,培养液成分参照Johnson M K 和G oyal A [3,4]的方法配制.不同浓度氮源的处理方法:以NaNO 3为氮源,设置6种不同氮浓度试验组,即0、1mmol/L 、2mmol/L 、3mmol/L 、4mmol/L 、5mmol/L ,经过10d 生长,分别测定它们的细胞生长情况以及β2胡萝卜素和叶绿素的含量;不同浓度磷源的处理方法:以KH 2PO 4为磷源,设置6种不同磷浓度试验组,即0、0.1mmol/L 、0.2mmol/L 、0.3mmol/L 、0.4mmol/L 、0.5mmol/L ,10d 生长后分别测出它们的细胞生长情况以及β2胡萝卜素和叶绿素的含量;不同浓度硫源的处理方法:以MgSO 4为硫源,设置6种不同硫浓度试验组,即0、1mmol/L 、2mmol/L 、3mmol/L 、4mmol/L 、5mmol/L ,10d 生长后分别测定它们的细胞生长情况以及β2胡萝卜素和叶绿素的含 2005年4月 第42卷第2期四川大学学报(自然科学版Journal of Sichuan University (Natural Science Edition Apr.2005Vol.42　No.2 量. 1.2.2　分析检测方法　取10mL藻液,离心弃上清,加入4mL丙酮提取色素,重复2~3次,直至藻体呈灰白色,测定提取液的光吸收值,根据Jensen公式[5]分别计算出叶绿素和β2胡萝卜素的含量.每组取3个样,测3次,取平均值,以减小试验误差. 2　结果 2.1　氮对盐生杜氏藻β2胡萝卜素和叶绿素积累的影响 　　图1阐明了不同氮浓度下盐生杜氏藻的生长情况,可见经过10d的生长,在氮浓度为2mmol/L时最适于盐生杜氏藻的生长,当缺氮时其生长基本停滞.而由于在氮浓度为2mmol/L时藻液中含有更多的细胞,当以单位体积藻液来测定β2胡萝卜素和叶绿素的含量时,在这个条件下单位体积的含量最高,而N为 0时含量最低(图2,这时β2胡萝卜素和叶绿素的比率达到最高(图3 . 图1　不同氮浓度下细胞浓度变化Fig.1　Cell concentration in the cultures under different concentration 图2　β2胡萝卜素、叶绿素含量的变化 Fig.2　Volumetricβ2carotene,chlorqphyll production in the cultures 图3　β2胡萝卜素和叶绿素的比率变化 ig.3　Volumetricβ2caro