高中生物选修三DNA重组技术应用基本工具.pptVIP

2.(2013·枣庄高二检测)现有一长度为1 000个碱基对(bp)的 DNA分子，用限制酶EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子仍是1 000 bp， 用KpnⅠ单独酶切得到400 bp和600 bp两种长度的DNA分子，用 EcoRⅠ、KpnⅠ同时酶切后得到200 bp和600 bp两种长度的DNA 分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是(　　) 【解题关键】解答本题的关键有两点： (1)会读图、析图，所给选项中有线形DNA、环状DNA。 (2)正确分析切割位点不同所得片段不同。 【解析】选D。从题干中“用限制酶EcoRⅠ酶切后得到的DNA分子仍是1 000 bp”，再结合选项中DNA分子的可能酶切图谱分析可知，此DNA分子是环状的，故A、B排除。同理，从“用KpnⅠ单独酶切得到400 bp和600 bp两种长度的DNA分子”，又可推知图谱中应有两个KpnⅠ酶切位点，故选D。 【变式备选】(2014·天水高二检测)限制酶是一种核酸切割酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。如图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ以及BglⅡ的识别序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列是什么(　　) A.BamHⅠ和EcoRⅠ　末端互补序列为AATT- B.BamHⅠ和HindⅢ　末端互补序列为GATC- C.EcoRⅠ和HindⅢ　末端互补序列为AATT- D.BamHⅠ和BglⅡ　末端互补序列为GATC- 【解析】选D。A项中BamHⅠ酶切出的末端序列为-GATC-，EcoRⅠ酶切出的末端序列为-AATT-，两者不互补；B项HindⅢ酶切出的末端序列为-AGCT-，与BamHⅠ酶切出的末端序列不互补；同理可推，C项中也不互补，只有D项中才互补。 二、基因工程中常用的载体——质粒 1.特点：质粒是一种裸露的、小型、双链、环状DNA分子。 2.本质：质粒是独立于细菌拟核DNA之外的小型DNA分子，不是细胞器。 3.质粒作为载体所具备的条件： (1)能自我复制：能够在受体细胞中进行自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。 (2)有切割位点：有一个至多个限制酶切割位点，供外源基因插入。 (3)具有标记基因：具有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 (4)无毒害作用：对受体细胞无毒害作用，否则受体细胞将受到损伤甚至死亡。 4.作用： (1)作为运输工具，将目的基因导入受体细胞。 (2)质粒携带目的基因在受体细胞内大量复制。 【思维拓展】 细胞膜上的载体与基因工程中的载体的区别 (1)化学本质不同：细胞膜上的载体化学成分是蛋白质；基因工程中的载体可能是物质，如质粒(DNA)、λ噬菌体的衍生物，也可能是生物，如动植物病毒等。 (2)功能不同：细胞膜上载体的功能是协助细胞膜控制物质进出细胞；基因工程中的载体是一种“分子运输车”，把目的基因导入受体细胞。 1.(2014·台州高二检测)下列关于基因工程中载体的说法，正确的是(　　) A.质粒是一种独立于细菌拟核外的链状DNA分子 B.所有的质粒都可以作为基因工程中的载体 C.质粒载体的复制和表达不遵循中心法则 D.作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因 【解题关键】解答本题的突破口： (1)明确天然质粒并不完全具备作为载体的全部条件。 (2)理解质粒上遗传信息的传递遵循中心法则。 【解析】选D。质粒是双链环状DNA分子，其复制和表达遵循中心法则。只有经过人工改造的质粒，才能作为基因工程的载体。质粒上的抗性基因利于重组DNA的鉴定和筛选。 2.目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒，pBR322质粒是较早构建的质粒载体，其主要结构如下图所示。 (1)构建人工质粒时要有抗性基因，以便于? 　　　　? 　。 (2)pBR322分子中有单个EcoRⅠ限制酶作用位点，EcoRⅠ只能识别序列—GAATTC—，并只能在G与A之间切割。若在某目的基因的两侧各有1个EcoRⅠ的切点，请画出目的基因两侧被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。 (3)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点，现将经BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理得到的目的基因，通过酶作用恢复　　　　　键，成功获得了重组质粒，说明　 。 (4)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图二的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒