CN103283604A百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN103283604A* *CN103283604A* (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 103283604 A (10)申请公布号 CN 103283604 A (43)申请公布日 2013.09.11 (21)申请号 201310225467.1 (22)申请日 2013.06.07 (71)申请人 南京工业大学大丰海洋产业研究院 地址 224100 江苏省盐城市大丰市大丰港经 济区海融广场西侧研究院过渡大楼 (72)发明人 张本厚 陈集双 胡燕花 贾明良 (74)专利代理机构 南京正联知识产权代理有限 公司 32243 代理人 王素琴 (51)Int.Cl. A01H 4/00 (2006.01) A61L 2/18 (2006.01) 权利要求书1页 说明书3页 权利要求书1 页 说明书3 页 (54)发明名称 百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法 (57)摘要 本发明提供一种百合组织培养中脱除外植体 内生菌的方法，通过预处理、内生菌浸出、表面消 毒、接种培养、连续消毒，采用无菌去离子水浸泡 百合外植体，可以使外植体表层细胞破裂，内生菌 溢出，易于清除。并采用连续表面消毒，消毒三次 后百合外植体的内生菌污染率可以控制在5% 左 右，为百合组织培养产业解决了内生菌污染严重 的问题。该种百合组织培养中脱除外植体内生菌 的方法，能够有效的杀灭百合鳞片中的内生菌，为 百合的组织培养提供了一种易操作、效果好的外 植体制备方法，且在整个过程中较大程度地节约 材料、降低成本，并能够最大限度的脱除百合外植 体中的内生菌，与常规的方法相比大大的节省了 百合外植体，减少了人力物力的投入。 A A 4 4 0 0 6 6 3 3 8 8 2 2 3 3 0 0 1 1 N N C C CN 103283604 A 权 利 要 求 书 1/1 页 1. 一种百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于, 包括以下步骤： a、预处理：将百合鳞茎用清水清洗去除表面泥沙，剥下鳞片再次清洗，在超净台中将百 合鳞片切成小块； b、内生菌浸出：将步骤a 中所得百合鳞片小块放入装有无菌去离子水的容器中，容器 密封后放置将内生菌浸出； c、表面消毒：在超净台中将步骤b 中无菌去离子水浸泡过的百合鳞片小块进行表面消 毒； d、接种培养：将步骤c 中表面消毒后的百合鳞片小块接种到固体培养基中，培养观察 有无内生菌； e、连续消毒：在步骤d 的接种后培养观察，如果培养基中长出百合内生菌，取出百合鳞 片进行连续消毒后继续接种观察，重复对长出百合内生菌的百合鳞片进行连续消毒与接种 观察，直到培养基中无百合内生菌长出。 2. 如权利要求1 所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于：所述 2 步骤a 的预处理中将百合鳞片去除表皮，并切割成0.5~6.0cm 的小块。 3. 如权利要求1 所述的百合组织培养中脱除外植体内生菌的方法，其特征在于：所述 步骤b 中所述密封容器放