第六章 染色体工程操作.pptVIP

由于多倍体动物具有生长速度快，成活率高及抗病能力强等特点，所以人工诱导多倍体、改善动物经济性状倍受重视。 异育银鲫与兴国红鲤杂交获得的复合四倍体，通过细胞方法证明其产生的原因是受精卵发生了两性融合。 为什么种间杂交会导致第二极体不排出，从而导致多倍体产生？ 水静压法：就是采用较高的水静压（65kg/cm2）来抑制第二极体的放出或第一次卵裂产生多倍体。此种方法诱导率高（90%~100%）、处理时间短（3~5min），对受精卵损伤小、成活率高。但该法需要专门的设备——水压机，成本较高，其样品室容量有限，处理卵的量有限，所以不适于大规模生产。 第四节 染色体介导的基因转移技术 将同特定基因表达有关的染色体或染色体片段转入受体细胞，使该基因得以表达，并能在细胞分裂中一代又一代地转递下去。该技术称为染色体介导的基因转移技术，又称为染色体转导。 微细胞介导的基因转移法（Microcell mediated gene transfer，MMGT） 染色体介导的基因转移法（Chromosome mediated gene transfer，CMGT） 微细胞介导的基因转移法 微细胞是指含有一条或几条染色体，外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体。 微细胞制备 微细胞融合 微细胞的制备 微细胞的融合 染色体介导转移法 染色体介导转移法是指分离得到相应的染色体后转入受体细胞的一种技术。染色体介导技术一般包括首先诱发细胞同步分裂，继而用秋水仙胺阻断细胞分裂于中期，再破碎细胞，通过离心收集大量的中期染色体，然后通过适当的分部或进一步的分类，即可转移到受体细胞中去。 分离染色体 染色体的转移 受体细胞的分离与鉴定 一、细胞同步化与染色体的分离 二、中期染色体的转移 三、导入基因的受体细胞的分离与鉴定 分离：利用选择性培养基进行筛选。 鉴定： 染色体转移技术的应用前景 染色体转移技术的应用前景 第五节 人工染色体 染色体要确保在细胞分裂中保持稳定，必须要能够自我复制和向子细胞中平均分配。它需要3个关键序列，包括自主复制DNA序列（autonomously replicating sequence，ARS）、着丝粒DNA序列（centromere DNA sequence，CEN)和端粒DNA序列（ telomere DNA sequence, TEL）。 将3个关键序列用分子生物学方法拼接起来就得到人造微小染色体（artificial minichromosome），在大片段DNA分子的克隆、基因组分析、基因功能鉴定、基因治疗以及研究染色体结构与功能关系等研究中得到了广泛的应用，具有极为重要的价值。目前，正在研究或应用的有： 酵母人工染色体(yeast artificial chromosome,YAC) 细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC） 哺乳动物人工染色体(mammalian artificial chromosome)。 基于ARS、CEN、TEL是线性染色体稳定的功能序列,人们利用这些序列构建载体, 重组后的DNA以线性状态存在, 这样不仅稳定,而且大大提高了插入外源基因的能力, 并且可以像天然染色体一样在寄主细胞中稳定复制和遗传，称为人工染色体。如利用从酵母染色体上分离的ARS、CEN、TEL序列构建载体，然后用这种载体构建的染色体即称为酵母人工染色体。 酵母人工染色体的构建 是基于大肠杆菌的 F 质粒构建的，高通量低拷贝的质粒载体。每个环状 DNA 分子中携带一个抗生素抗性标记，一个来源于大肠杆菌 F 因子（致育因子）的严谨型控制的复制子 oriS （ Shizuya et al. 1992 ），一个易于 DNA 复制的由 ATP 驱动的解旋酶（ （RepE） 以及三个确保低拷贝质粒精确分配至子代细胞的基因座 （ parA , parB , 和 parC ） 。 * * 第六章 染色体工程 染色体变异 染色体结构变异 染色体易位：一个染色体上某一区段与另一非同源染色体上的区段发生互换。 染色体缺失：染色体的某一区段及其带有的基因一起丢失 染色体倒位：染色体上某一区段连同它带有的基因顺序发生180度倒转。 染色体重复：一个染色体上增加了相同的某个区段。 染色体变异 染色体数变异 一是体细胞内以染色体组为基数进行的整倍性变化，以整倍体染色体数目变化产生的变异会产生多倍体和单倍体； 另一种是染色体组内的个别染色体数目有所增减，使细胞内的染色体数目不是基数的的完整倍数，因此被称为非整倍体。 什么是染色体工程？ 染色体工程（chromosome engineering）是人们按照一定的设计，有计划地消减、添加或代换同种