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微生物思考题及参考答案 1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油 ?起什么作用？ 答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净 , 以防上次实验的污染 . 操作时 , 先低倍再高倍 . 用完要 擦掉油 . 加香柏油 , 作用是增加折光率 , 也就是增加了显微镜的分辨率 . 油的折光率和分 辨率成反比 ( 有公式 ), 同时与波长成正比 . 2. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转 到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用 这种同焦现象， 可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用 细调节器即可对物像清晰聚焦， 从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头 或载玻片。 3. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 答：物镜的 NA值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 . 4. 美蓝染色液作用时间的不同 , 对酵母菌死细胞数量有何影响 , 试分析原因 答：会造成更多的死细胞，在显微镜下观察，活的是透明无色，衰老的是淡蓝色，死亡 的是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长，会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验 结果。 5. 镜检时如何区分放线菌基内菌丝，气生菌丝以及孢子丝 一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可 看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。 6. 在进行细菌涂片时应注意哪些环节 1、载玻片应该冷却后再涂片。 2 、如果是涂布液体，可以用毛细管或接种环滴一小滴， 然后轻轻抹开，一圈足够。 3 、如果是涂布菌落或菌苔，应该在载玻片上先滴一滴水， 再将菌落或菌苔涂布上去，接种环的尖蘸一点点即可。 4 、为了节省时间，可以将干燥 和热固定合并成一步。但是应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。 5 、染色时间 视染色液种类而定。如结晶紫只需几十秒，亚甲基蓝则需一到两分钟。 6 、冲洗时，水 流不能太大，而且尽量避免水流直接冲在涂片上。 7 、冲洗后干燥，可以用酒精灯加热 以节省时间，同样的，应该避免高温，因为温度一高，细菌会变形。 7. 进行细菌制片时为什么要进行加热固定 ?在加热固定时应注意什么 ? 固定的目的有三个： 1）杀死微生物，固定细胞结构。 2 ）保证菌体能更牢的粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉。 3 ）改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。 固定时应注意： 手持玻片， 菌膜朝上， 在微火过 3 次 （手指触摸玻片反面， 不烫手为宜） ， 固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。 8. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察 1. 因为用油镜观察时 , 镜头离玻片会很近 . 如果未完全干燥 , 载玻片上的液体会污染油镜 镜头 . 镜头非常精密 , 被污染后不利于下次观察 .2 、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃 之间折光率，造成视野不够清晰。 9. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节。 10. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问 题? 答：菌龄太老，细胞壁通透性改变。着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太 清楚 , 问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌。 11. 革兰氏染色中那一步是关键 ?为什么？你是如何操作的？ 革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。如果脱色过度，革兰氏阳性菌也 可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌； 如脱色时间过短， 革兰氏阴性菌