王镜岩生化件 dna的重组.pptxVIP

一、同源重组(homologous recombination)发生在同源序列之间、非特异性重组交换区具有相同或相似的序列 两个DNA分子重组酶——涉及到双螺旋的断裂、修复、 连接和重组体的释放 相同的部位不同部位（异位重组）中心环节（一）同源重组的分子模型 —Holliday模型片段重组体拼接重组体产生3’单链末端DNA修复（二）细菌的基因转移与重组1、细菌的接合作用（conjugation）——遗传物质从供体(donor)转移到 受体(receptor)的重组过程。供体细胞：雄性受体细胞：雌性接合质粒：编码接合相关蛋白（如性菌毛）致育因子（fertility factor）、F因子、性因子F因子化学本质是DNA以自主状态存在 或整合到细菌的染色体上可在细菌细胞间转移并传递遗传物质5’性导(sexduction)与F?因子2、细菌的遗传转化（ transformation）——细菌吸收外源DNA而发生遗传性状的改变特点：（1）感受态与感受态因子 细菌能从环境吸收DNA的生理状态 主要受感受态因子(蛋白)影响 感受态一般出现在细菌对数生长后期，可以诱导或加强感受态（2）供体DNA与受体细胞结合结合发生在受体细胞特定部位对供体DNA片段有一定要求结合过程是一个可逆过程（3）DNA摄取及整合结合点饱和后，细菌开始摄取外源DNA多为单链摄入，另一条链在膜上降解3、细菌的转导（ transduction）——细菌基因通过噬菌体而转移4、细菌的细胞融合——细胞质膜融合发生的基因转移与重组烈性噬菌体温和噬菌体普遍性转导（generalized transduction）未整合整合完全转导流产转导局限性转导（restricted transduction）特异性转导溶原期时噬菌体DNA整合在细菌染色体特定部位，噬菌体DNA发生偏差分离，将自身一段DNA留在细菌染色体上，而带走了细菌DNA上的基因。当其转导并整合到受体菌中，使受体菌获得供体菌的某些遗传性状。——所转导的只限于供体菌上个别的基因普遍性转导与局限性转导的区别区别要点普遍性转导局限性转导转导发生的时期裂解期溶原期转导的遗传物质供体菌DNA任何部位或质粒噬菌体及供体菌特定部位DNA转导的后果完全转导或流产转导受体菌获得供体菌DNA特定部位的遗传特性转导频率较低增加1000倍（三）重组有关的酶1、chi 位点保守的8碱基非对称序列大肠杆菌DNA每5-10Kb自然发生一次被recBCD酶所识别刺激重组——重组热点2、recBCD酶解旋酶活性：在SSB存在时解开双螺旋ATP酶活性核酸外切酶活性核酸内切酶活性——产生DNA单链RecBCD从一端靠近Chi位点在移动中降解DNA在Chi位点3’ 4-6bp行使内切酶活性丢掉RecD只保留解旋酶活性3、RecA有两种不同的活性形式SOS反应中的蛋白酶活性促进单链DNA和双链分子中互补链配对 （单链置换双链中的同源链） 单链吸收/单链同化 Single-strand assimilationχ(chi)—sequence具有物种，基因和genome seq.的特异性in E.coli genome 1000 chi-seq.chiRecBCDDNA解旋 再螺旋 4-6bpOHRecA-p 只要在入侵单链和双链之间有自由的末端 RecA即可促进单链的同化分支迁移4、RuvAB复合物——置换RecARuvA（四聚体） 识别Holliday连接体的结构 在交换点处与DNA四条链结合RuvB（六聚体） ATP酶，有解旋酶活性 ——为分支迁移提供动力5、RuvC核酸内切酶切开Holliday连接体识别不对称位点ATTG二、特异位点重组（一）λ噬菌体DNA的整合与切除1、 λ噬菌体DNA的物理状态裂解phage： 为独立分子形式 在受侵染细菌中为环状溶原状态：是细菌染色体的整合部分切除整合（原噬菌体）整合在附着位点（attachment sites）上发生特异位点重组的结果倒位切除特异的重组位点—附着位点 细 菌∽attB，由BOB’组成 噬菌体∽ attP，由POP’组成 O称为核心序列、B、P称为臂重组酶——λ整合酶（integrase，Int） 非细菌重组所必需整合宿主因子（integration host factor，IHF）Xis蛋白：改变DNA结构，使其对整合呈惰性 参与切除反应 整合反应噬菌体编码宿主编码交错7bp切开DNA（二）鼠伤寒沙门氏菌的鞭毛相变（三）免疫球蛋白基因的重排三、转座重组转座子（transposon）——可以发生转座的DNA转座元件本身可导致：序列的缺失、插入以及将宿主序列转到新位点同源便携区（portable region of homology）——为重组提供底物位点对表型有积极/消极的作用