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土壤微生物量碳测定方法及应用
土壤微生物量碳(Soil microbial biomass)不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要 作用,同时是一个重要活性养分库,直接调控着土壤养分(如氮、磷和硫等)的保持和释放 及其植物有效性。近 40 年来,土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。由于 土壤微生物的碳含量通常是恒定的,因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。测定土壤微生物碳的主要方法为熏蒸培养法
(Fumigation-incubation, FI)和熏蒸提取法(Fumigation-extraction, FE)。
熏蒸提取法(FE 法)
由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加
入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。Voroney (1983)发现熏蒸土壤用 0.5mol·L K
2
SO
4
提
取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。Vance 等(1987)建立了熏蒸提取法测定土
壤微生物碳的基本方法:该方法用 0.5mol·L K
2
SO
4
提取剂(水土比 1:4)直接提取熏蒸和
不熏蒸土壤,提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定;以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机
碳增加量除以转换系数 K
EC
(取值 0.38)来计算土壤微生物碳。
Wu 等(1990)通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究,建立了熏蒸提取——碳自 动一起法测定土壤微生物碳。该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准 确度。
林启美等(1999)对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改 进,以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。
对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数 K
EC
的取值,有很多研究进行了大量
的研究。测定 K
EC
值的实验方法有:直接法(加入培养微生物、用 C 底物标记土壤微生物)
和间接法(与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP 法及底物诱导呼吸法比较)。提取液中有机
碳的测定方法不同(如氧化法和仪器法),那么转换系数 K
EC
取值也不同,如采用氧化法和一
起法 K
EC
值分别为 0.38(Vance 等,1987)和 0.45(Wu 等,1990)。不同类型土壤(表层)
的 KEC 值有较大不同,其值变化为 0.20-0.50(Sparling 等,1988,1990;Bremer 等, 1990)。Dictor 等(1998)研究表明同一土壤剖面中不同浓度土层土壤的转换系数 KEC 有较 大的差异,从表层 0-20cm 土壤的 KEC 为 0.41,逐步降低到 180-220cm 土壤的 KEC 为 0.31。
一、基本原理
熏蒸提取法测定微生物碳的基本原理是:氯仿熏蒸土壤时由于微生物的细胞膜被氯仿破
坏而杀死,微生物中部分组分成分特别是细胞质在酶的作用下自溶和转化为 K
2
SO
4
溶液可提
取成分(Joergensen,1996)。采用重铬酸钾氧化法或碳-自动分析仪器法测定提取液中的碳
含量,以熏蒸与不熏蒸土壤中提取碳增量除以转换系数 K
EC
来估计土壤微生物碳。
二、试剂配制
(1) 硫酸钾提取剂(0.5mol·L
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):取 871.25g 分析纯硫酸钾溶解于蒸馏水中,定溶至
10L。由于硫酸钾较难溶解,配制时可用 20L 塑料桶密闭后置于苗床上(60- 100rev·min )12 小时即可完全溶解。
(2) 0.2 mol·L (1/6K2Cr2O7)标准溶液:称取 130℃烘 2-3 小时的 K2Cr2O7(分析纯) 9.806g 于 1L 大烧杯中,加去离子水使其溶解,定溶至 1L。K2Cr2O7 较难溶解,可加 热加快其溶解。
(3) 0.1000 mol·L (1/6K
2
Cr
2
O
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)标准溶液:取经 130℃烘 2-3 小时的分析纯重铬酸钾
4.903g,用蒸馏水溶解并定溶至 1L。
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(4) 邻啡罗啉指示剂:取邻啡罗啉指 1.490g 溶于含有 0.700g 分析纯硫酸亚铁
(FeSO4·7H2O)的 100ml 蒸馏水中,此溶液易变质,应密闭保存于棕色瓶中。 (5) 硫酸亚铁标准溶液(0.05 mol·L ):称取 13.9g 分析纯硫酸亚铁(FeSO4·7H2O),
溶于 800ml 蒸馏水中,慢慢加浓硫酸 5ml(防止水解),定溶至 1L,保存于棕色瓶中。 此溶液易被空气氧化,每次使用时必须标定其准确浓度:
硫酸亚铁溶液标定方法:吸取 0
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