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生物技术制药复习知识点 第一章 绪论 1.生物制药的研究内容包括基因工程制药，细胞工程制药，酶工程制药和发酵工程制药。 2.生物技术制药，是采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动 物来生产所需的医药品。 生物技术药物，是采用 DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白 质、治疗性抗体或核酸类药物。 生物药物，指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部 分，甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。 现代生物药物四种类型：①应用 DNA 重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。 ②基因药物，如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。③来自动植物和微生物的天 然生物药物。④合成与部分合成的生物药物。 生物药物按功能用途分为三类：治疗药物，预防药物和诊断药物。 生物技术药物的特性：分子结构复杂，具种属特异性，治疗针对性强、疗效高，稳定性 差，基因稳定性，免疫原性、重复给药会产生抗体，体内半衰期短，受体效应，多效性和 网络效应，质量控制的特殊性，生产系统的复杂性。 生物技术制药特征：高技术，高投入，长周期，高风险，高收益。 基因诊断：指采用分子生物学的方法在 DNA 水平或 RNA 水平对基因的结构和功能进行分 析从而对特定的疾病进行诊断。 第二章 基因工程制药 1.利用基因工程技术生产药品的优点：（1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和 多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足 够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质 的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4） 内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进 行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 2.基因工程技术就是将目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细 胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 3.基因工程药物制造的主要程序是：目的基因的获得，构建 DNA 重组体，构建基因工程菌， 目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化，产品的检验和产品包装等。 对于真核细胞来源的目的基因，是不能直接进行分离的。 目的基因获得的方法：反转录法，化学合成法，逆转录-聚合酶链反应法和改造现有基因。 6.基因表达：结构基因在生物体中的转录、翻译以及所有加工过程。 7.对于宿主细胞其应该满足的条件： 容易获得较高浓度的细胞； 能利用易得廉价原料； 不致病、不产生内毒素； 发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态； 容易进行代谢调控； 容易进行 DNA 重组技术操作； 产物的产量、产率高，产物容易提取纯化。 8.原核细胞大肠杆菌中的表达的特点： - 1 - 不存在信号肽，产品多为胞内产物； 分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包涵体，产物须在下游处理过程中经过变性 和复性处理才能恢复其生物活性； 不存在翻译后修饰作用（故只能表达翻译后修饰对其生物功能并非必须的真核蛋白质）； ④翻译通常从甲硫氨酸的 AUG 密码子开始，故目的蛋白质的 N 端常多余一个甲硫氨酸残基， 容易引起免疫反应； 产生的内毒素难以除去； 产生的蛋白质酶会破坏蛋白质。 9.真核细胞酵母特点： 真核生物细胞，有翻译后加工过程； 基因组小，仅为大肠杆菌的 4 倍； 世代时间短，有单倍体和双倍体两种形式； 廉价大规模培养、无毒； 基因操作与原核生物相似； 可以建立有分泌功能的表达系统，将产物分泌出胞外，分离纯化工艺相对简单； 表达产物能糖基化。 真核基因在原核细胞中表达，其表达载体必须具备如下条件：（1）载体能独立地进行 复制；（2）应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记；（3）应具有很强的启动子；（4） 应具有阻遏子；（5）应具有很强的终止子；（6）所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信 号。 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？ 答：（1）外源基因的拷贝数:与载体在宿主中的拷贝数及稳定性直接相关。 （2）外源基因的表达效率 影响因素； 启动子的强度； 核糖体结合位点的有效性； SD 序列和起始密码 ATG 的间距； 密码子的组成等。 真核基因在大肠杆菌中的表达形式有融合蛋白的形式，非融合蛋白的形式和分泌型表达 蛋白药物基因。 质粒不稳定性分为分裂不稳定和结构不稳定。 提高质粒稳定性的方法：选择合适的宿主菌，选择合适的载体，选择压力，分阶段控制 培养，控制培养条件，固定化。 高密度发酵：一般指培养液中工程菌的菌体浓度在 50 g 干重/L 以上，理论上的最高值可 达到 200 g 干重/L。 实现高密度发酵的方法：①改进发