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微生物综合实验
——土壤微生物得分离、纯化及鉴定
摘要: 利用分离纯化微生物得基本操作技术对土壤中得微生物进行分离与纯化,通过对菌落形态得观察、染色鉴定以及一系列得生理生化试验得结果,辅以菌株耐药性测定,最终通过查阅《伯杰氏系统细菌学手册》对照种属特征,判断所分离纯化得细菌所属得属。
关键词:土壤微生物,分离纯化,鉴定,耐药性,《伯杰氏系统细菌学手册》
前言: 土壤就是微生物得良好生境,土壤中有多种类群得微生物,它们对自然界物质得转化与循环起着极为重要得作用,对农业生产与环境保护有着不可忽视得影响。
据统计,每克土壤中含有微生物数量几亿到几十亿不等,包括了从细菌,真菌,藻类以及原生动物几乎所有得类群。土壤中微生物得数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。一般地说,在土壤表面,由于日光照射及干燥等因素得影响,微生物不易生存,离地表10?cm~30?cm得土层中菌数最多,随土层加深,菌数减少。
土壤内含有细菌生活所需得氮素养料(NH4+,No3-),各种盐类及微量元素,一般还含有1一15%有机物质(来源予死亡得动植物及动物排泄物)。地表下一定深度得土壤中含有丰富得水分与空气。土壤得PH接近中性,也适宜细菌生活。土壤就是由大小不等得团粒组成,团粒之间得孔隙为水与空气所充满,细菌就就是生活在这些孔隙中。由于胶体表面得吸附性质,使细菌与土壤中得有机、无机物质互相吸附着而形成无机——有机——生物复合体。所以土壤就是细菌生活得良好环境,在其中含有大量得细菌与其它微生物。一克耕作土壤约含几亿细菌与放线菌,几十万个霉菌、5万个藻类植物与25万个原生动物。
通过土壤微生物得分离纯化,得到纯种,再进行相关得实验,如:菌落观察、革兰氏染色、芽孢染色、生理生化试验等,根据实验结果,查阅《伯杰氏系统细菌学手册》确定所分离纯化细菌所属得属。在此过程中熟悉相关操作。
【实验目得】
掌握从土壤中分离纯化细菌得能力
掌握培养基得制备与灭菌技术
微生物得分离纯化方法与无菌操作技术。
掌握微生物基本鉴定得方法。
学会利用微生物得生理生化特性对微生物进行定属。
实验基本操作得练习与提高。
提高团队合作得意识。
【实验器材】
土壤样品:
山东大学微生物楼门口石碑后10cm深得土壤样品10g
试剂:
微生物基本鉴定:草酸铵结晶紫染液、卢戈氏染液、95%乙醇,番红复染液、5%孔雀绿水溶液,0、5%番红水溶液等
生理生化实验:卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等
头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖苷类、大环内酯类 四种抗生素
其它:香柏油与二甲苯、无菌水等
仪器与用具:?
酒精灯、接种针、平皿、试管、试管架、烧杯、量筒、锥形瓶、德汉氏小管 、显微镜、
擦镜纸、PH试纸、载玻片、载玻片夹子、玻璃涂棒、镊子、滴管、纱布、牛皮纸、等
培养基
LB液体培养基、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
淀粉培养基、油脂培养基(大分子物质水解实验)
葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基(内附倒置得德汉氏小管)(糖发酵实验)
蛋白胨水培养基(吲哚实验)
葡萄糖蛋白胨水培养基(甲基红实验)
【实验原理】
土壤微生物得得分离及纯化
?自然界中各种微生物混杂生活在一起,要研究某种微生物得特性,首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂得微生物群体中获得只含有某一株微生物得过程称为微生物得分离与纯化。土壤就是微生物生活得大本营,可以从中分离到很多有价值得菌株。此次实验采取平板分离法,该方法操作简便,普遍用于微生物得分离与纯化,微生物在固体培养基上生长形成得单个菌落可以就是由一个细胞繁殖而成得集合体,因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。 微生物得观察可以用显微镜观察其细胞形态, 也可以用肉眼观察其菌落形态。 前者就是微生物得显微镜观察技术,后者就是微生物得肉眼观察技术。
?平板分离法主要有: = 1 \* ROMAN I平板划线分离法 = 2 \* ROMAN II稀释涂布平板法、后者除能有效分离纯化微生物外,还可用于测定样品中活菌数量。
?平板菌落计数法: 就是将待测菌液经过适当稀释,涂布在平板上,经过培养后,在平板上形成肉眼可见得菌落。统计菌落数,根据稀释倍数与取样量计算出样品中细胞密度。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,平板上形成得每个菌落不一定就是单个细胞生长繁殖形成得,有得可能来自2个或多个细胞。因此,平板菌落计数得结果往往比样品中实际细胞数低。为了清楚地阐述平板菌落计数得结果,现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品得活菌含量。
= 4 \* GB3 ④菌落形态描述: 通过培养得方法使肉眼瞧不见得
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