深部真菌药物敏感试验标准操作规程.doc

深部真菌药物敏感试验标准操作规程 1．目的 规范深部真菌药物敏感试验操作规程，确保药敏结果的准确。 2．适用范围 本操作规程适用于念珠菌属和新型隐球菌。 3．选药原则 根据CLSI M27-A2的建议选择以下受试药物，5-氟胞嘧啶（5-FC）、两性霉素B（AMB）、氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）。 4．质控 见表5-55. 表5-55 深部真菌药敏试验质控结果 QC1:近平滑念珠菌ATCC 22019 QC2:克柔念珠菌ATCC 6258 5-FC S AMB MIC≤0.5mg/L FCA MIC=1~4 mg/L ITR MIC≤0.125~0.25 mg/L VRC MIC≤0.06~0.125 mg/L 5-FC I/R AMB MIC≤0.5~2mg/L FCA MIC=8~32 mg/L ITR MIC≤0.125~0. 5 mg/L VRC MIC=0.125~0.5mg/L 5．试验材料和仪器 ATB FUNGUS 3，无菌生理盐水，ATB电子移液器。ATB F2培养基。 6．操作步骤 6.1 打开一个0.85%氯化钠培养基安？（或API培养悬液），采集不超过4日的菌落，制备成浊度相当于2McFarland的悬浮液。用Farland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT，此菌悬液必须在准备后立即使用。 6.2 使用一移液管转移20μl此悬浮液到一ATB F2培养基的安？中。 6.3 用ATB电子移液管混匀ATB F2培养基，避免产生气泡，使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135μl的ATB F2培养基，盖好试条盖子。 6.4 把试条放入一个密封容器或是一个装有吸潮纸是的GENbox型广口容器里，在有氧条件下35℃（+2℃）的环境中，念珠菌属要培养24小时（+2小时），新型隐球菌要培养48小时（+6小时）。 6.5通过ATB仪器自动判读结果。 7．判断标准 见表5-56，5-57. 表5-56 念珠菌分界点（单位：mg/L） 药物 S I R 5-FC ≤4 18~20 ≥32 AMB ND ND ND FCA ≤8 16~32 ≥64 ITR ≤0.125 0.25~0.5 ≥1 VRC ≤1 2 ≥4 表5-57 新型隐球的菌分界点（单位：mg/L） 药物 S I R 5-FC ≤4 8~16 ≥32 AMB ND ND ND FCA ≤4 8 ≥16 ITR ND ND ND VRC ND ND ND 8．注意事项 8.1 在自动读取数据前，应擦拭试条的中间部分，去除可能存在的小滴液体，以便仪器辨认试条代码。 8.2 一个或两个生长对照杯状凹中的生长缺失时，测试无效，必须重复进行。 8.3在培养后，带有脱水的杯状凹的试条可能给予错误结果，必须重复测试。 8.4 对于两性霉素B(AMB)，在自动判读时，建议肉眼检查在杯状凹外围是否有个别菌落或生长。 8.5不同的操作环节之间间隔时间过长（从接种液的配制到试条的培养）可能会影响结果。 8.6只能使用纯培养物，混合的或是污染的培养物可能会影响结果。 8.7由于希木龙念珠菌（Candida haemulonii）的生长不稳定干扰MIC的判断，故不能使用ATB FUNGUS3条对其做检测。 8.8在检测白念珠菌，都伯林念珠菌和热带念珠菌时，氟康唑，伊曲康唑和伏立康唑可出现拖尾现象，导致MIC偏高，尤其在使用仪器判断结果的时候。针对这三个药建议肉眼判读其MIC值，特别是当伏立康唑结果耐药时（因为对伏立康唑耐药的非常少见）。 9．结果解释 9.1由于克柔念珠菌对氟康唑天然耐药，试验结果应被系统地解释为耐药（R）。 9.2对于两性霉素B，MIC≥2mg/L，建议判断为耐药，（新型隐球菌通常的MIC为0.5和1mg/L。） 9.3针对光滑念珠菌的检测，建议将其对氟康唑和（或）伊曲康唑敏感的结果改为中介（I），因为该菌对这两个药存在固有的敏感性低的现象。 参考文献 [1]Reference Method for Borth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts.NCCLS M27-A2,2002 [2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京：东南大学出版社，2006 编写人： AAA、BBB 操作人：本室操作人员 批准人：