张华 微生物蛋白质组学 技术篇.pdfVIP

微生物的蛋白质组学微生物的蛋白质组学 微生物的蛋白质组学微生物的蛋白质组学 技术篇技术篇 技术篇技术篇 一、一、蛋白质组学技术体系蛋白质组学技术体系 一一、、蛋白质组学技术体系蛋白质组学技术体系 三大技术体系三大技术体系 三大技术体系三大技术体系 ①蛋白质分离技术：①蛋白质分离技术：双向电泳双向电泳 （2（2--DE/DIGE)DE/DIGE)和色谱法和色谱法 ①蛋白质分离技术：①蛋白质分离技术：双向电泳双向电泳 （（22--DE/DIGE)DE/DIGE)和色谱法和色谱法 （HPLC)（HPLC)，， （（HPLC)HPLC)，， ②蛋白质鉴定技术：②蛋白质鉴定技术：生物质谱技术生物质谱技术、、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术、酵母、酵母 ②蛋白质鉴定技术：②蛋白质鉴定技术：生物质谱技术生物质谱技术、、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术、酵母、酵母 双杂交系统、噬菌体展示技术等。双杂交系统、噬菌体展示技术等。 双杂交系统、噬菌体展示技术等。双杂交系统、噬菌体展示技术等。 ③蛋白质匹配数据库分析技术：生物信息学③蛋白质匹配数据库分析技术：生物信息学 ③蛋白质匹配数据库分析技术：生物信息学③蛋白质匹配数据库分析技术：生物信息学 二、二、双向电泳双向电泳 二二、、双向电泳双向电泳 双向电泳的原理双向电泳的原理 双向电泳的原理双向电泳的原理 电泳时，蛋白质迁移速度取决于他们的电泳时，蛋白质迁移速度取决于他们的 电泳时，蛋白质迁移速度取决于他们的电泳时，蛋白质迁移速度取决于他们的 分子形状、分子形状、大小大小及及所带电荷所带电荷多少，双向电泳多少，双向电泳 分子形状、分子形状、大小大小及及所带电荷所带电荷多少，双向电泳多少，双向电泳 利用后两项特征使蛋白质能够有效分离。利用后两项特征使蛋白质能够有效分离。 利用后两项特征使蛋白质能够有效分离。利用后两项特征使蛋白质能够有效分离。 第一向第一向 （First dimension（First dimension）） 第一向第一向 （（First dimensionFirst dimension）） 等电聚焦等电聚焦 （（isoelectricisoelectricfocusing，focusing，IEFIEF），），即根据蛋白即根据蛋白 等电聚焦等电聚焦 （（isoelectricisoelectric focusingfocusing，，IEFIEF），），即根据蛋白即根据蛋白 质的等电点质的等电点 （pI（pI））差异将蛋白质分离差异将蛋白质分离。。 质的等电点质的等电点 （（pIpI））差异将蛋白质分离差异将蛋白质分离。。 第二向第二向 （Second dimension（Second dimension）） 第二向第二向 （（Second dimensionSecond dimension）） 十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS（SDSPAGE），），即即 十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠--聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳 （（SDSSDSPAGE），），即即 利用蛋白质的分子量差异将蛋白质分离利用蛋白质的分子量差异将蛋白质分离。。 利用蛋白质的分子量差异将蛋白质分离利用蛋白质的分子量差异将蛋白质分离。。 自从双向电泳技术一产生，人们就认识到其作为一种生物化学分离技术的重自从双向电泳技术一产生，人们就认识到其作为一种生物化学分离技术的重 自从双向电泳技术一产生，人们就认识到其作为一种生物化学分离技术的重自从双向电泳技术一产生，人们就认识到其作为一种生物化学分离技术的重 要性，但这一技术得到广泛的应用还应归功于以下几个方面的改进：要性，但这一技术得到广泛的应用还应归功于以下几个方面的改进： 要性，但这一技术得到广泛的应用还应归功于以下几个方面的改进：要性，但这一技术得到广泛的应用还应归功于以下几个方面的改进： 第一，第一，固相固相pH梯度胶梯度胶，使